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錦囊:iFluor 系列染料大集合

 

AAT Bioquest的iFluor 染料是一系列高度水溶性熒光染料,用于標記生物分子,如蛋白質和抗體。該系列染料涵蓋紫外 - 可見光到近紅外光譜,該系列染料可以匹配任何儀器設置和多種多重檢測組合。 iFluor 染料共軛物具有優異的亮度和光穩定性,優于大多數AlexaFluor®共軛物和其他光譜相似的共軛物。

圖1.將HeLa細胞與(Tubulin +)或(Tubulin-)小鼠抗微管蛋白一起孵育,然后與iFluor 488山羊抗小鼠IgG綴合物(綠色,左圖)或Alexa Fluor 488山羊抗小鼠IgG綴合物(綠色,右圖)孵育。 細胞核分別用Hoechst 33342(藍色)染色。

 

iFluor 染料和其共軛物的特點:

1.亮度

iFluor 共軛物比其他光譜相似的共軛物(例如AlexaFluor®染料,熒光素染料,花青染料等)表現出更強的熒光。

2.光穩定性

iFluor 共軛物比光譜相似的共軛物更具光穩定性,熒光不易消失,有更多時間可以觀察、照相。

3.水溶性

iFluor 活性染料具有高度水溶性??梢栽跊]有有機溶劑的情況下進行綴合,得到在儲存期間抗沉淀的綴合物。

4.pH不敏感

iFluor 染料在廣泛的pH范圍內具有強大的高熒光性。

5.儀器兼容性

iFluor 染料的吸收光譜與常見激發光源的主要輸出波長相匹配。

6.顏色選擇

iFluor 染料有多種不同顏色可供選擇,從紫色(350 nm)到紅外(860 nm)。

 

iFluor染料選擇指南

熒光團 Ex / Em(nm) 替代品 反應形式
硫醇 炔烴 疊氮化物
iFluor 350 344/488 香豆素•AlexaFluor®350•DyLight 350 #1020   #1060 #1080 #1070    
iFluor 405 402/425 CascadeBlue®•AlexaFluor®405•DyLight 405 #1021   #1053 #1081 #1071    
iFluor 430 433/495 AlexaFluor®430 #1052   #1054        
iFluor 450 451/502   #1026   #1057        
iFluor 488 492/516 AlexaFluor®488•DyLight 488 #1023   #1062 #1082 #1072 #1000 #999
iFluor 514 527/554 AlexaFluor®514 #1024            
iFluor 532 543/563 AlexaFluor®532 #1025   #1061        
iFluor 546 541/557 AlexaFluor®546 #1048            
iFluor 555 556/569 Cy3®•AlexaFluor®555•DyLight 550 #1028   #1063 #1083 #1073 #1093 #1092
iFluor 560 559/571   #1040            
iFluor 568 568/587 Rhodamine Red •AlexaFluor®568 #1049   #1055        
iFluor 594 587/603 Texas Red®•AlexaFluor®594•DyLight 594 #1029   #1064        
iFluor 610 609/627 AlexaFluor®610 #1038            
iFluor 633 638/652 AlexaFluor®633 #1030   #1056        
iFluor 647 654/669 Cy5®•AlexaFluor®647•DyLight 650 #1031   #1065 #1085 #1074 #1091 #1090
iFluor 660 660/677 AlexaFluor®660 #1032       #1075    
iFluor 670 669/682 Cy5®B #1033            
iFluor 680 683/700 Cy5.5®•IRDye®700•AlexaFluor®680 #1035   #1066 #1086 #1076    
iFluor 700 690/713  AlexaFluor®700 #1036   #1067 #1087 #1077    
iFluor 710 712/736   #1045       #1078    
iFluor 750 759/777 Cy7®•AlexaFluor®750•DyLight 750 #1037   #1068 #1088 #1079    
iFluor 790 786/811 IRDye®800•AlexaFluor®790•DyLight 800 #1368 #1360 #1366 #1364 #1362    
iFluor 800 801/820   #1379 #1375 #1378        
iFluor 810 812   #1389 #1385 #1388        
iFluor 820 820   #1399 #1395 #1398         
iFluor 840 836   #1403 #1401 #1402        
iFluor 860 854   #1409 #1405 #1408        
     琥珀酰亞胺酯 馬來酰亞胺 酰肼 疊氮化物 炔烴
反應形式

 

iFluor 染料光譜特性(全)

iFluor 染料 Ex / Em(nm) Ext. Coeff.1 FQY2 CF at 260 nm3 CF at 280 nm4
iFluor 350 344/488 20,000 0.95 0.83 0.23
iFluor 405 402/425 37,000 0.91 0.48 0.77
iFluor 430 433/495 40,000 0.78 0.68 0.3
iFluor 450 451/502 40,000 0.82 0.45 0.27
iFluor 488 491/516 75,000 0.9 0.21 0.11
iFluor 514 527/554 80,000 0.83 0.25 0.11
iFluor 532 543/563 90,000 0.68 0.26 0.16
iFluor 546 541/557 100,000 0.67 0.25 0.15
iFluor 555 556/569 100,000 0.64 0.23 0.14
iFluor 560 559/571 130,000 0.57 0.048 0.069
iFluor 568 568/587 100,000 0.57 0.34 0.15
iFluor 594 587/603 180,000 0.53 0.05 0.04
iFluor 610 609/627 110,000 0.85 0.32 0.49
iFluor 633 638/652 250,000 0.29 0.062 0.044
iFluor 647 654/669 250,000 0.25 0.03 0.03
iFluor 660 660/677 250,000 0.26 0.07 0.08
iFluor 670 669/682 250,000 0.63 0.019 0.024
iFluor 680 683/700 220,000 0.23 0.097 0.094
iFluor 700 690/713 220,000 0.23 0.09 0.04
iFluor 710 712/736 190,000 0.14 0.12 0.07
iFluor 750 759/777 275,000 0.12 0.044 0.039
iFluor 790 786/811 275,000 0.13 0.1 0.09
iFluor 800 801/820 250,000 0.11 0.03 0.08
iFluor 810 811/822 250,000 0.05 0.09 0.15
iFluor 820 820/849 250,000 N / D 0.11 0.16
iFluor 840 836/876 200,000 0.02 0.2 0.09
iFluor 860 852/877 250,000 N / D 0.1 0.14
  1. Ext. Coeff.:在其最大吸收波長處的消光系數。消光系數的單位為cm -1 M -1。
  2. FQY :在水性緩沖液(pH 7.2)中的熒光量子產率。
  3. 260 nm處的CF是用于消除染料對260 nm處的吸光度的影響的校正因子。
  4. 280 nm處的CF是用于消除染料對280 nm處的吸光度的影響的校正因子(用于肽和蛋白質標記)。
  5. 與蛋白質偶聯后,熒光強度明顯增加。

 

圖2.用小鼠抗微管蛋白染色的HeLa細胞的圖像,然后用iFluor 594山羊抗小鼠IgG(紅色,Cat#16548)染色。 用鬼筆環肽-iFluor 488綴合物(綠色,Cat#23115)染色肌動蛋白絲,并用DAPI(藍色,Cat#17507)染色細胞核。


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