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首頁 > 技術天地 > 細胞運動過程中的GSH與NAD+

細胞運動過程中的GSH與NAD+

 

細胞運動是一個高度協同的復雜過程,在運動過程中,不僅需要肌動蛋白微絲/微管,還有多種細胞器、酶等共同調節。


谷胱甘肽( GSH )是由L -半胱氨酸、L -谷氨酸和甘氨酸三個氨基酸組成的三肽。它參與蛋白質二硫鍵的形成和維持、氨基酸跨細胞膜的運輸,以及解毒。由于谷胱甘肽含有巰基,它是細胞內主要的內源性抗氧化劑,通過中和自由基和過氧化物等活性氧防止損傷。通過檢測生物樣品中還原型和氧化型谷胱甘肽可以客觀的評估細胞、組織抗氧化能力以及解毒狀態等。

我們研發了兩種用于谷胱甘肽的檢測試劑盒:1.Amplite 熒光法谷胱甘肽檢測試劑盒;2.Amplite 熒光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率檢測試劑盒。

1.GSH檢測

Amplite 熒光法谷胱甘肽( Glutathione )檢測試劑盒是一種靈敏的、一步法熒光檢測試劑盒,在100 µL的檢測體積內檢測到至少1皮摩爾的GSH。該方法采用一種專有的非熒光和pH依賴的谷胱甘肽探針,該探針與巰基反應后具有強熒光。該檢測可采用方便的96孔或384孔微孔板進行實驗,無需分離步驟,易于自動化。在Ex / Em = 490 / 520 nm處,利用熒光酶標儀可以很容易地檢測到熒光信號。

圖1 . GSH劑量反應檢測。用Amplite 熒光谷胱甘肽試劑盒( Cat # 10055 )在96孔黑色平板上進行檢測。培養10分鐘可檢測到低至10nM ( 1pmol / well )的GSH。

2.GSH/GSSG比率檢測

我們的Amplite 熒光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率檢測試劑盒和 Amplite 快速熒光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率檢測試劑盒,可在 100 µL 檢測體積中定量低至 1 皮摩爾的 GSH。每個試劑盒都使用專有的非熒光探針,該探針在與 GSH 反應時會發出強熒光,并且可以使用熒光酶標儀在 Ex/Em = 490/520 nm 處檢測其信號。檢測可以在方便的 96 孔或 384 孔微孔板進行實驗,并且無需分離步驟即可輕松適應自動化。這些試劑盒的不同之處在于探針的溶解度。 Amlite 熒光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率檢測試劑盒使用的是可溶于 DMSO 的探針 Thiolite Green。 Amlite 快速熒光法谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率檢測試劑盒使用水溶性探針 Thiolite Green 520WS。

圖 2. GSH 和總 (GSH + GSSG) 劑量反應的檢測是用 Amlite 熒光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率檢測試劑盒進行檢測的。藍線:僅存在 GSH。紅線:存在 1:1 GSH/GSSG。

 

表1:谷胱甘肽檢測的相關產品

品牌 名稱 貨號 規格 Ex/Em(nm)
AAT Bioquest Amplite 熒光法谷胱甘肽檢測試劑盒 綠色熒光 #10055 200 Tests 510/524
AAT Bioquest Amplite 熒光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率檢測試劑盒 綠色熒光 #10056 200 Tests 510/524
AAT Bioquest Amplite 熒光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速檢測試劑盒 綠色熒光 #10060 200 Tests 510/524

 

煙酰胺腺嘌呤二核苷酸是豐富的可溶性輔助因子,在主要代謝途徑中經歷可逆氧化和還原。在細胞中,它們以未磷酸化(NAD 和 NADH)和磷酸化(NADP 和 NADPH)形式以氧化和還原狀態存在。這些二核苷酸成對工作,每對都有不同的功能。它們已成為癌癥研究的焦點,因為作為代謝物,它們可以將代謝途徑與轉錄控制、表觀遺傳學和細胞信號傳導聯系起來,它也是研究細胞從正常代謝轉變為癌細胞代謝的重要工具。

1.NAD/NADH

 NAD最常與分解代謝途徑(糖酵解和氧化磷酸化)相關,但其在細胞中的作用不僅僅涉及能量代謝。NAD是多種信號通路的重要底物,參與基因表達的表觀遺傳調控。它是ADP核糖基化的底物,在DNA修復、信號調節和信號傳導中發揮重要作用。NAD / NADH的比值影響許多酶的活性,特別是糖酵解酶的活性。

2.NADP/NADPH

NADP / NADPH是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸中含量最少的一對。NADPH與大分子的生物合成有關,為這些合成反應提供必要的還原力。生物合成增加的特點是迅速增殖的細胞,如癌細胞,因為NADPH被認為是癌癥代謝產生的關鍵分子。它還對活性氧( Reactive oxygen species,ROS )的生成具有響應作用。

圖 3. 使用Amlite 比色法 NAD/NADH 比率檢測試劑盒(貨號#15273)檢測 96 孔白色透明底微孔板中的 NAD/NADH 比率。

表3:NAD/NADH相關產品

貨號 產品名稱 規格
15257 Amplite NAD+/NADH檢測試劑盒(熒光法) 紅色熒光 400 Tests
15258 Amplite NAD+/NADH檢測試劑盒(比色法) 400 Tests
15261 Amplite NADH檢測試劑盒(熒光法) 紅色熒光 400 Tests
15263 Amplite NAD/NADH比率檢測試劑盒(熒光法) 紅色熒光 250 Tests
15271 Amplite NADH檢測試劑盒(比色法) 400 Tests
15273 Amplite NAD/NADH比率檢測試劑盒(比色法) 250 Tests
15275 Amplite NAD+/NADH檢測試劑盒(比色法)靈敏度增強型 400 Tests
15280 Amplite NAD檢測試劑盒 (熒光法)藍色熒光 200 Tests

 

表4:NADP/NADPH相關產品

貨號 產品名稱 規格
15260 Amplite NADP+/NADPH檢測試劑盒(比色法) 400 Tests
15262 Amplite NADPH檢測試劑盒(熒光法) 紅色熒光 400 Tests
15264 Amplite NADP/NADPH比率檢測試劑盒(熒光法) 紅色熒光 250 Tests
15265 ReadiUse 即用型NADPH再生試劑盒 1000 Tests
15266 ReadiUse 即用型NADP再生試劑盒 200 Tests
15272 Amplite NADPH檢測試劑盒(比色法) 400 Tests
15274 Amplite NADP/NADPH比率檢測試劑盒(比色法) 250 Tests
15276 Amplite NADP+/NADPH檢測試劑盒(比色法)靈敏度增強型 400 Tests
15281 Amplite NADP檢測試劑盒(熒光法)藍色熒光 200 Tests
15295 Cell Meter 細胞內NADH / NADPH熒光成像試劑盒 深紅色熒光 100 Tests

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