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CCK-8 常見問題詳解(精)

 

今天百螢生物為您介紹CCK-8在使用中常見的問題

1:CCK的保存和穩定性如何?

答:CCK穩定性高,避光條件-20℃有效期2年,4℃有效期1年。經常使用建議4℃保存,避免反復凍融。CCK正常顏色為粉紅色,若顏色發生明顯偏差,質量可能有發生變化。

 

2:CCK的細胞毒性如何?

答:CCK毒性非常低,因此CCK檢測完后相同的細胞還能用于其它細胞增殖檢測如結晶紫染色法,中性紅染色法或DNA熒光染色法。

 

3:CCK會對活細胞進行染色嗎?

答:不會,首先WST-8不會進入細胞染色,整個顯色反應都是在培養體系中進行的。另外WST和WST-8甲臜都屬于高度水溶性組分,反應結束更換新的培養液,即可清除外源組分。

 

4:做細胞活性檢測時,每孔應該接種多少個細胞?

答:當使用標準96孔板時,貼壁細胞的最小接種量至少為1,000個/孔(100 μL培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100 μL培養基)。

 

5:若是使用6孔或者24孔板進行試驗,CCK試劑使用量怎么樣呢?

答:如果要使用6孔板或24孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK溶液。

 

6:能否用384孔板進行細胞增殖與活性檢測的實驗呢?

答:可以,CCK-8產品的使用量為每孔培養基總體積的10%。建議先將CCK-8產品稀釋一倍,然后加入培養基總體積的20%即可,這樣可減少誤差。

 

7:培養基的本底顏色如酚紅會不會影響細胞活性的檢測呢?

答:不會的,培養基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光值而消去,因此不會對檢測造成影響。

 

8:在加入CCK-8時可否不更換培養基?

答:一般情況下可以不更換培養基。但是如果培養基里有氧化還原性物質的話,有可能會產生誤差,必須更換其它培養基。

 

9:只可以在450 nm波長處測OD值嗎?

答:可以在450 nm波長處測OD值,但是若無此波長的濾光片,可選擇吸光度在430-490 nm之間的濾光片,但是450 nm濾光片的檢測靈敏度最高。

 

10:若是暫不檢測OD值,該如何處理?

:若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定,吸光度不會發生變化

 

11:在實驗中OD值太高,怎么解決?

答:可以縮短加入CCK-8后的培養時間。例如:可以把加入CCK-8試劑后的培養時間由2小時縮短為1小時。此外,可適當減少細胞的數量。

 

12:如果OD值太低,怎么解決?

答:可以采取2個辦法:1、適當增加細胞數量  2、延長加入CCK-8試劑后的反應時間。

 

13:應該每次做標準曲線嗎?

答:建議每次做。雖然細胞是一樣的,但是細胞的狀態不一定一樣。對于狀態不一樣的細胞,建議每次做標準曲線。

 

14:在cck-8顯色過程中,如何終止反應

:有以下幾種方法(96孔板):1.在顯色反應后,將培養板放置4°冰箱內;2.每孔加入10ul 0.1M HCL溶液。 3.每孔加入10ul 1%(w/v)的SDS溶液。注:反應停止后,應在24h內測定

 

15:如何減少由于CCK-8試劑在孔壁上的殘留所帶來的誤差

答:可以在加樣前用培養基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣

 

16.好用的 CCK-8 試劑盒推薦?

:百螢生物生產的 Cell Counting Kit-8(CCK-8)細胞活力檢測試劑盒已廣泛用于生物活性因子的活性檢測,抗腫瘤藥物的篩選,細胞增殖的測定,細胞毒性檢測以及藥敏等與細胞活性和增殖相關的實驗

 

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