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鬼筆環肽-AF488標記

貨號23153存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格300 Tests價格3840
Ex (nm)499Em (nm)520
分子量~1300溶劑DMSO
產品詳細介紹


簡要概述

產品外觀形態:液體(注:鬼筆環肽系列產品有固體和液體兩種,液體為DMSO溶解后的產品,則不需再溶解。)

鬼筆環肽-AF 488標記探針會選擇性地結合F-肌動蛋白,一般在納摩爾濃度下使用,鬼筆環肽衍生物是非常方便的熒光探針,用于標記、鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動蛋白,細胞培養物或無細胞實驗。肌動蛋白是一種球狀的,大約42kDa的蛋白質,幾乎存在于所有真核細胞中。 它也是最高度保守的蛋白質之一,與藻類和人類不同的物種相差不超過20%。肌動蛋白參與許多重要的細胞過程,包括肌肉收縮、細胞運動、細胞分裂和胞質分裂、囊泡和細胞器運動、細胞信號傳導,以及細胞連接和細胞形狀的建立和維持。

鬼筆環肽比肌動蛋白單體更緊密地結合肌動蛋白絲,導致肌動蛋白亞基從絲狀末端解離的速率常數降低,基本上通過防止絲解聚來穩定肌動蛋白絲。此外,發現鬼筆環肽抑制F-肌動蛋白的ATP水解活性。鬼筆環肽在細胞中以不同濃度起作用不同。當以低濃度引入細胞質時,鬼筆環肽將較少聚合形式的細胞質肌動蛋白以及微絲蛋白聚集成聚集的肌動蛋白聚合物的穩定“島”,但它不會干擾應力纖維,即厚的微絲束。鬼筆環肽的性質是通過用熒光類似物標記鬼筆環肽并用它們染色肌動蛋白絲用于光學顯微鏡來研究F-肌動蛋白在細胞中的分布的有用工具。鬼筆環肽的熒光衍生物已經證明在定位活細胞或固定細胞中的肌動蛋白絲以及在體外可視化單個肌動蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環肽衍生物已被用作高分辨率肌動蛋白研究中的重要工具。 鬼筆環肽-AF 488標記探針是AAT Bioquest為多色成像應用提供的一種熒光鬼筆環肽衍生物。我們提供的鬼筆環肽iFluor488是AF488鬼筆環肽的完美替代品。

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產品說明書

樣品分析方案

概述

在微孔板孔中制備樣品

從樣品中取出液體

添加鬼筆環肽-AF 488 標記溶液(100μL/孔)

在室溫下染色細胞20至90分鐘

清洗細胞在顯微鏡下觀察樣品

注意:將小瓶加熱至室溫并在打開前短暫離心。

 

操作步驟

1.制備1X鬼筆環肽綴合物工作溶液:加入1μL1000X鬼筆環肽綴合物DMSO溶液至1mL含1%BSA的PBS中。

注意1:鬼筆環肽綴合物未使用的1000X DMSO儲備溶液應等分并儲存在-20℃,避光。

注意2:不同的細胞類型可能染色不同。鬼筆環肽綴合物工作溶液的濃度的制備需要根據實際而定。

2.染色細胞:

2.1執行甲醛固定,在室溫下將含3.0-4.0%甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意:避免使用任何含甲醇的固定劑,因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。 優選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS沖洗固定細胞2-3次。

2.3可選:在PBS中加入0.1%Triton X-100固定細胞3至5分鐘,以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。

2.4將100μL/孔(96孔板)鬼筆環肽綴合物工作溶液加入固定的細胞中,并在室溫下染色細胞20至90分鐘。

2.5在加上蓋玻片之前,用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過量的鬼筆環肽綴合物,然后在顯微鏡下進行,密封和成像。

 

參考文獻

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Authors: Fupo He, Teliang Lu, Ye Tian, Xue Li, Fei Zuo, Xuetao Shi, Jiandong Ye
Journal: Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials (2018)



說明書
鬼筆環肽-AF488標記.pdf


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