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Peko Green雙鏈核酸染料

貨號TJ1701存儲條件 建議在低于-15℃溫度下冷凍保存
規格1 ml價格1750
Ex (nm)502Em (nm)523
分子量溶劑DMSO
產品詳細介紹


簡要概述

Peko Green 染料是一種新型的dDNA染料。其檢測靈敏度高,可檢測到pg級DNA。檢測范圍寬,可跨越4個數量級。特異性好,基本不受ssDNA和RNA的影響,并且可以耐受一定濃度的鹽,尿素,已醇,氯仿,去垢劑,蛋白等干擾。對微量的雙鏈DNA進行定量在各種生物學應用中都顯得非常重要。例如cDNA文庫的構建,亞克隆的DNA片段的純化,定量DNA擴增產物,在藥物中DNA分子殘留的測定等。檢測核酸濃度最常用的方法就是檢測核酸在260nm (A260)處的光吸收,此方法主要的缺點是單鏈核酸和單核苷酸會產生干擾信號,核酸樣品中的雜質也會影向結果。光吸收不能區分DNA和RNA,靈敏度也相對較低(用1cm的比色杯在A260值為0.1時相對應的雙鏈DNA濃度為5μg/mL)。目前使用Peko Green 染料定量檢測DNA已經廣泛用于生物學檢測。



產品說明書

實驗方法

1.試劑準備

Peko Green是以1毫升的濃縮液形式保存在無水DMSO(二甲基亞砜)中。實驗當天,配制2x Peko Green試劑的工作溶液,用1xTE液(10mM的Tris-HCl,1mM EDTA中,pH值為7.5)按1:200的比例稀釋濃縮液。如果要準備好足夠的工作液檢測20個樣品,可在20毫升1xTE加入100μL Peko Green dsDNA定量試劑。由于試劑容易吸附到玻璃表面,要在一個塑料容器中配制。Peko Green試劑容易光降解,所以應將配好的溶液用箔包主或放置暗處避光保存。溶液最好在配制數小時內使用,以保證最佳結果。

 

2.DNA標準曲線

2.1 標準品工作液的配制:

Sigma小牛胸腺DNA干粉(貨號:D4522-1MG)1mg (Tris, NaCL等濃度已成標準體系),加入1mL雙蒸水,配制成1mg/mL的標準工作液。

 

2.2 標準品工作液的稀釋:

母液稀釋:取10mL(1mg/mL) 標準品工作液加入到990 μLTE溶液中,稀釋成10μg/mL。再取10μL(10mg/mL)標準品工作液加入到990 μLTE溶液中,稀釋成100ng/mL。

倍比稀釋:取800μL(100ng/mL) 標準品工作液加入到200 μLTE溶液中,稀釋成80ng/mL(藥典規定:熒光染色方法DNA含量在。25-80ng/mL范圍線性較好,此方法DNA檢出限為0.3ng/mL)。再取500mL(80ng/mL)標準品工作液加入到500 mLTE溶液中,濃度稀釋到40ng/mL。然后按倍比稀釋成20ng/mL,10ng/mL,5ng/mL,2.5ng/mL,1.25ng/mL,0.625ng/mL的標準品溶液,見表1。

 

表 1標準品工作液及樣品排續在一個實心的黑色96孔板*

DS0 DS0 樣品 樣品
DS1 DS1 ... ...
DS2 DS2    
DS3 DS3    
DS4 DS4    
DS5 DS5    
DS6 DS6    
DS7 DS7    

*備注: DS= 標準品工作液從0到40ng/mL平行樣品

 

3.雙鏈DNA樣品分析

3.1倍比稀釋后的各梯度標準品溶液,樣品,和染料工作液各取100μL混勻,避光室溫放置5分鐘見表1。

備注: 如果用 384孔板, 則倍比稀釋后的各梯度標準品溶液,樣品,和染料工作液各取25mL即可。

3.2用熒光酶標儀在激發/發射波長= 490/525 nm(截止波長為510 nm)檢測熒光強度。

3.3樣品DNA 含量可根據標準品曲線算出。





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