Cell Navigator 溶酶體標記試劑盒 深紅色熒光

貨號22659存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格500 Tests價格1896
Ex (nm)597Em (nm)619
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Cell Navigator 溶酶體標記試劑盒 深紅色熒光 是一套熒光成像工具,用于標記亞細胞細胞器,如膜,溶酶體,線粒體,細胞核等。該試劑盒使用專有的溶解性染料,可以通過溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中,該指示劑的溶質是一種疏水性化合物,很容易滲透完整的活細胞,并被保留在溶酶體內,進入溶酶體后,其熒光顯著增強,這一關鍵特征顯著降低了其染色背景。適用于多種不同類型的研究中包括細胞粘附、趨化性、多藥耐藥性、細胞活力,細胞凋亡和細胞毒性。該試劑盒提供所有的必需組分和最佳細胞標記方法,適用于增殖和非增殖細胞,可用于懸浮細胞和貼壁細胞。LysoBrite染料的性能明顯優于同等的LysoTracker染料(來自Invitrogen)。LysoBrite染料可以在活細胞中停留一周以上,對細胞的毒性極小,而LysoTracker染料只能使用幾個小時,LysoBrite染料可以存活幾代細胞。此外,LysoBrite染料比LysoTracker染料具有更高的光穩定性,百螢生物是為您提供最優質的Cell Navigator 溶酶體標記試劑盒。Cell Navigator 溶酶體標記試劑盒 深紅色熒光 是美國AAT Bioquest研發的產品。

 

適用儀器


熒光顯微鏡  
激發:

Texas Red濾波片

發射: Texas Red濾波片
推薦孔板: 黑色透明


產品說明書

試驗方案

  1. 準備細胞
  2. 添加LysoBriteDeep Red染料工作溶液
  3. 在37°C孵育30分鐘至60分鐘
  4. 添加染色緩沖液
  5. 室溫孵育30分鐘
  6. 在熒光顯微鏡下Ex/Em =590/620nm(Texas Red濾光片組)處進行分析

注意:1)實驗前,取出試劑盒進行室溫凍結。

 

樣品示例及使用方法

1.準備溶酶體染色溶液:

1.1  取出試劑盒中A、B、C組分,室溫避光靜置5-10min。

1.2  移取10μL LysoBrite Deep Red(組分A),用5mL細胞染色緩沖液(組分B)進行稀釋,制備染料工作液。

注意:1) 10μL的500X LysoBrite Deep Red(組分A)足夠完成一個96孔板,根據要求分裝并儲存未使用的500X LysoBrite Deep Red(組分A),避免反復凍融。

2)熒光溶酶體指示劑的最佳濃度根據實際應用而改變,可以根據探針的滲透性對細胞類型、細胞或組織的染色條件進行調整。

 

2.細胞染色:

  • 對于貼壁細胞:

在96孔黑色墻壁/透明底板(50μL/孔/ 96孔板)或裝有適當培養基內的培養皿的蓋玻片上培養細胞,當細胞達到所需的匯合時,在96孔板或培養皿內加入1/2的LysoBrite Deep Red工作液,在37℃、5%CO2條件下培養箱中孵育30分鐘至60分鐘,將(50 µL /孔/96孔板)的染色緩沖液B(組分C)加入LysoBrite Deep Red工作溶液板中,在室溫下孵育15-30分鐘。再使用配有Texas Red 濾片組的熒光顯微鏡觀察細胞,使之帶深紅色熒光(Ex/Em = 590/620 nm)。

注意:1)LysoBrite Deep Red對細胞的毒性很小或沒有,它可以用于細胞跟蹤。為了進行細胞跟蹤,可跳過添加染色緩沖液B的步驟,只需將染料工作液替換為生長培養基,然后在熒光顯微鏡下觀察即可。如果細胞看起來沒有充分染色,建議適當增加染料濃度或孵育時間。

 

  • 對于懸浮細胞:

在1000rpm條件下離心培養液5分鐘,得到細胞沉淀并棄去上清液,在預熱(37℃)生長培養基例如(100 µL /管)中輕輕重懸細胞沉淀,然后添加1/2體積(50 µL /管)LysoBrite Deep Red工作溶液。在37℃、5%CO2條件下培養箱中孵育30分鐘至60分鐘,將(50 µL /孔/96孔板)的染色緩沖液B(組分C)加入LysoBrite Deep Red工作溶液板中,在室溫下孵育15-30分鐘。再使用配有Texas Red 濾片組的熒光顯微鏡觀察細胞,使之帶深紅色熒光(Ex/Em = 590/620 nm)。

注意:  1)LysoBrite Deep Red對細胞的毒性很小或沒有。它可以用于細胞跟蹤。為了進行細胞跟蹤,可跳過添加染色緩沖液B的步驟,只需將染料工作液替換為生長培養基,然后在熒光顯微鏡下觀察即可。如果細胞看起來沒有充分染色,建議適當增加染料濃度或孵育時間。 

        2)懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®(BD Biosciences)處理過的蓋玻片上,并作為貼壁細胞染色。

 

示例數據分析及圖示

圖一:在Costar黑色透明底96孔板中用Cell Navigator 溶酶體染色試劑盒LysoBrite Deep Red染色Hela細胞的熒光成像結果。

圖二:HeLa細胞分別用A和B,置于Costar黑壁/透明底96孔板中染色后的熒光成像結果,在0秒和120秒的曝光時間下,使用Olympus熒光顯微鏡對信號進行比較。

A: Cell Navigator溶酶體染色試劑盒(Cat# 22659)、B: LysoTracker®Red DND-99(來自Invitrogen公司)。

 

參考文獻

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說明書
Cell Navigator 溶酶體標記試劑盒 深紅色熒光.pdf


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