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Cell Meter 活細胞Caspase 3/7結合檢測試劑盒 綠色熒光

貨號20100存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格25 Tests價格3840
Ex (nm)493Em (nm)517
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

我們的Cell Meter 活細胞半胱天冬酶活性檢測試劑盒基于半胱天冬酶的熒光抑制劑。這些抑制劑具有細胞滲透性和非細胞毒性。一旦進入細胞,半胱天冬酶抑制劑與活性半胱天冬酶共價結合。胱天蛋白酶3/7的激活對于細胞凋亡的起始是重要的。已經證明胱天蛋白酶3/7對肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)具有底物選擇性。該試劑盒使用TF3-DEVD-FMK作為半胱天冬酶3/7活性的熒光指示劑。TF3-DEVD-FMK在凋亡細胞中不可逆地結合活化的胱天蛋白酶3/7。一旦與胱天蛋白酶3/7結合,熒光試劑保留在細胞內。結合抑制caspase 3/7,但不會阻止細胞凋亡的進行。

有多種參數可用于檢測細胞凋亡。這種Cell Meter 活細胞半胱天冬酶3/7活性測定試劑盒旨在通過測量活細胞中胱天蛋白酶3/7的活化來檢測細胞凋亡。它用于定量凋亡細胞中活化的caspase 3/7活性,或用于篩選caspase 3/7抑制劑。TF3-DEVD-FMK,紅色標記試劑,允許通過熒光顯微鏡,流式細胞儀或熒光酶標儀直接檢測凋亡細胞中活化的半胱天冬酶3/7。該試劑盒為所有必需組分提供優化的分析方案。

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適用儀器


流式細胞儀  
參數 見表1
熒光顯微鏡  
推薦孔板: 黑色透明
通道: 見表1
熒光酶標儀  
推薦孔板: 黑色孔板
通道: 見表2

表1:用于流式細胞儀和熒光顯微鏡的熒光強度檢測

  流式細胞儀 熒光顯微鏡
FAM-DEVD-FMK FL1 通道 FITC 通道
Propidium Iodide FL2 通道 TRITC 通道
Hoechst Dye 紫色激光 DAPI 通道

表2:熒光酶標儀的熒光強度檢測

  激發 發射 cutoff
FAM-DEVD-FMK FL1 通道 FITC 通道 515nm
Propidium Iodide FL2 通道 TRITC 通道  
Hoechst Dye 紫色激光 DAPI 通道  


產品說明書

分離細胞的檢測方案

概述

用測試化合物制備細胞,密度為5×105至2×106個細胞/ mL

將TF3-DEVD-FMK以1:150的比例加入細胞溶液中

在室溫下孵育1小時

沉淀細胞,用緩沖液或生長培養基洗滌并重懸細胞

在Ex / Em = 550 / 595nm處分析細胞

注:使用前將所有部件在室溫下解凍。

 

操作方法

1.根據您的特異性誘導方案,將細胞培養至最適于細胞凋亡誘導的密度,但不超過2 x 106個細胞/ mL。同時,對于每種標記條件,以與誘導群體相同的密度培養非誘導的陰性對照細胞群。以下是一些誘導懸浮培養細胞凋亡的例子:

1)用2μg/ ml喜樹堿處理Jurkat細胞3小時。

2)用1μM星形孢菌素處理Jurkat細胞3小時。

3)用4μg/ ml喜樹堿處理HL-60細胞4小時。

4)用1μM星形孢菌素處理HL-60細胞4小時。

注意:應對每個細胞系進行單獨評估,以確定誘導細胞凋亡的最佳細胞密度。

2.通過向TF3-DEVD-FMK(組分A)的小瓶中加入50μLDMSO制備150X TF3-DEVD-FMK DMSO儲備溶液。 將150×TF3-DEVD-FMK以1:150的比例加入細胞溶液中,并將細胞在37℃,5%CO2培養箱中孵育1小時。

注1:對于TF3-DEVD-FMK標記,細胞可以濃縮至~5×10 6個細胞/ mL。 未使用的150X TF3-DEVD-FMK DMSO儲備溶液應分為單次使用的等分試樣并儲存在-20°C。

注2:對于粘附細胞,用0.5mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整,并在用TF3-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培養基洗滌細胞一次。

注3:適當的孵育時間取決于所用的細胞類型和細胞濃度。 優化每個實驗的孵育時間。

3.將細胞以約200g旋轉5分鐘,并用1mL洗滌緩沖液(組分B)洗滌細胞兩次。 將細胞重懸于所需量的洗滌緩沖液中。

注1:TF3-DEVD-FMK是熒光的,因此清除任何未結合的試劑以消除背景非常重要。

注2:對于分離的細胞,應將細胞濃度調節至每個微量滴定板孔中2-5×10 5個細胞/100μL等分試樣,用于步驟5。

4.如果需要,用DNA染色標記細胞(例如用于死細胞的Nuclear Green DCS1,或用于細胞核染色的整個群體的Hoechst)。

5.通過熒光顯微鏡,流式細胞儀或熒光酶標儀在Ex / Em = 550/595 nm處檢測熒光強度(對于Nuclear Green DCS1,Ex / Em = 490/525 nm,對于Hoechst染料,Ex / Em = 350/461 nm)

5.1對于流式細胞儀,使用Ex / Em = 550/595 nm(用于Nuclear Green DCS1染色的FL1通道)的通道監測熒光強度。

5.2用于熒光顯微鏡和熒光酶標儀。 將100μL細胞懸浮液置于96孔黑色微量滴定板的每個孔中。

注意:如果需要平衡細胞濃度,調整誘導細胞的懸浮體積以接近非誘導細胞群的細胞密度。 如果您的細胞治療不會導致受刺激細胞群數量的顯著損失,則此調整步驟是可選的。

5.3使用TRITC通道(用于Nuclear Green DCS1染色的FITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)在熒光顯微鏡下觀察細胞。

5.4使用熒光酶標儀,使用Ex / Em = 550/595 nm(在570 nm處截止)底部讀取模式監測熒光強度。

 

參考文獻

An inner activation gate controls TMEM16F phospholipid scrambling
Authors: Trieu Le, Zhiguang Jia, Son C Le, Yang Zhang, Jianhan Chen, Huanghe Yang
Journal: Nature communications (2019): 1846

Drosophila Subdued is a moonlighting transmembrane protein 16 (TMEM16) that transports ions and phospholipids
Authors: Trieu Le, Son C Le, Huanghe Yang
Journal: Journal of Biological Chemistry (2019): jbc--AC118

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1--12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

 

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產品名稱 貨號
Cell Meter 活細胞Caspase 3/7結合檢測試劑盒 紅色熒光 Cat#20101


說明書
Cell Meter 活細胞Caspase 3/7結合檢測試劑盒 綠色熒光 .pdf


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