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Cell Meter JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 適合微孔板檢測

貨號22800存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格500 Tests價格3840
Ex (nm)508Em (nm)524
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Cell Meter JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 適合微孔板檢測 是美國AAT Bioquest研發的用于檢測線粒體膜電位的試劑盒,JC-1在許多實驗室中被廣泛使用,但其水溶性差導致極大的不便。即使在1μM濃度下,JC-1也傾向于在水性緩沖液中沉淀。當需要高染料濃度時,JC-10被開發成為JC的優異替代品。與JC-1相比,JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能夠選擇性地進入線粒體,并隨著膜電位的增加可逆地將其顏色從綠色變為橙色。該性質是由于膜極化時JC-10聚集體的可逆形成導致發射光從520nm(即JC-10單體形式的發射)向570nm(即J-聚集體形式的發射)的移動。當在490nm處激發時,隨著線粒體膜變得更加極化,JC-10的顏色從綠色橙色可逆地變為綠色橙色。使用通常安裝在所有流式細胞儀中的過濾器可以檢測兩種顏色??梢栽跓晒馔ǖ?(FL1)中分析綠色發射,在通道2(FL2)中分析綠色橙色發射。除了用于流式細胞儀外,它還可用于熒光成像和熒光微孔板平臺。這種Cell Meter 線粒體膜電位檢測試劑盒使研究人員能夠以酶標儀的形式運行JC-10檢測,并為監測線粒體膜電位變化提供了最強大的檢測方法。

這種Cell Meter JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒使研究人員能夠以酶標儀的形式運行JC-10檢測,并為監測線粒體膜電位變化提供了最可靠的檢測方法。該試劑盒基于陽離子親脂性JC-10染料檢測細胞中線粒體膜電位的變化。在正常細胞中,JC-10濃縮在線粒體基質中,在那里形成紅色熒光聚集體。然而,在凋亡和壞死細胞中,JC-10擴散出線粒體。它變成單體形式并以綠色熒光染色細胞。該試劑盒可用于篩選凋亡激活劑和抑制劑??梢砸苑奖愕?6孔和384孔熒光微量滴定板形式進行測定。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商,為您提供最優質的線粒體膜電位熒光探針。

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適用儀器


熒光酶標儀  
激發: 490/540nm
發射: 525/590nm
cutoff: 515/570nm
推薦孔板: 黑色透明
讀取模式: 底讀模式


產品說明書

96孔板樣品分析

概述

準備細胞

添加測試化合物

添加JC-10染料加載溶液(50μL/孔/ 96孔板或12.5μL/孔/ 384孔板)

在37℃,5%CO2培養箱中孵育30至60分鐘

添加測定 緩沖液B(50μL/孔/ 96孔板或12.5μL/孔/ 384孔板)

在Ex / Em = 490/525和540/590 nm處監測熒光強度

 

操作步驟

1.準備細胞:
1.1對于貼壁細胞:在生長培養基中將細胞以20,000至80,000個細胞/孔/90μL過夜,96孔板或5,000至20,000個細胞/孔/20μL,用于384孔板。
1.2對于非粘附細胞:從培養基中離心細胞,然后將細胞沉淀懸浮于100,000-200,000細胞/孔/90μL的培養基中,用于96孔poly-D賴氨酸平板或25,000-50,000細胞/孔 /20μL,用于384孔聚-D賴氨酸板。 在實驗之前,在制動器關閉的情況下以800rpm離心板2分鐘。
注意:應對每個細胞系進行單獨評估,以確定誘導細胞凋亡的最佳細胞密度。

 

2.準備JC-10染料加載溶液:
2.1使用前在室溫下清洗所有套件組件。
2.2將50μL100XJC-10(組分A)加入5mL測定緩沖液A(組分B)中,充分混合。
注意:將未使用的100X JC-10(組分A)等分并保存在-20 oC。 避免反復凍/融循環。

 

3.運行JC-10測定:
3.1通過向所需緩沖液(例如PBS或HHBS)中加入10μL10X測試化合物(96孔板)或5μL5X測試化合物(384-板)來處理細胞。
注意:在添加化合物之前不必洗滌細胞。然而,如果測試的化合物對血清敏感,則可在添加化合物之前吸出生長培養基和血清因子。在抽吸后將相同體積的HHBS添加到孔中(例如對于96孔板為90μL或對于384孔板為20μL)?;蛘?,細胞可以在無血清培養基中生長。
3.2在室溫或37℃,5%CO2培養箱中培養細胞板至少15分鐘或所需的時間(對于Jurkat細胞,用喜樹堿4-6小時或用星形孢菌素處理3-5小時)到誘導細胞凋亡
3.3將50μL/孔(96孔板)或12.5μL/孔(384孔板)的JC-10染料加載溶液(來自步驟2.2)加入細胞板(來自步驟3.2)。
3.4將染料加載板在37℃,5%CO2培養箱中孵育30-60分鐘,避光。
注意:適當的孵育時間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。
3.5在讀取熒光強度之前,將50μL/孔(96孔板)或12.5μL/孔(384孔板)的測定緩沖液B(組分C)加入染料加載板(來自步驟3.4)。
注1:裝載后請勿清洗電池。
注2:對于非粘附細胞,建議在加入分析緩沖液B(組分C)后,以800rpm離心細胞板2分鐘,同時停止制動。
3.6使用底部讀取模式監測Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm處截止)和540 / 590nm(在570nm處截止)的熒光強度以進行比率分析。

 

數據分析

Em在525/590處的熒光強度比率用于數據分析。

圖1.在Jurkat細胞中用JC-10和JC-1測量了喜樹堿誘導的線粒體膜電位變化。 用喜樹堿(10mM)處理Jurkat細胞4小時后,向孔中加入JC-1和JC-10染料上樣溶液并孵育30分鐘。 使用NOVOstar酶標儀(BMG Labtech)在Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm下測量J-聚集體和單體形式的JC-1和JC-10的熒光強度。

 

參考文獻

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產品名稱 貨號
Cell Meter JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 適合流式細胞檢測 Cat#22801


說明書
Cell Meter JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 適合微孔板檢測 .pdf


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