Cell Meter JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 適合流式細胞檢測

貨號22801存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格100 Tests價格3840
Ex (nm)508Em (nm)524
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Cell Meter JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 適合流式細胞儀檢測 是美國AAT Bioquest研發的用于檢測線粒體膜電位的試劑盒,JC-1在許多實驗室中被廣泛使用,但其水溶性差導致極大的不便。即使在1μM濃度下,JC-1也傾向于在水性緩沖液中沉淀。當需要高染料濃度時,JC-10被開發成為JC的優異替代品。與JC-1相比,JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能夠選擇性地進入線粒體,并隨著膜電位的增加可逆地將其顏色從綠色變為橙色。該性質是由于膜極化時JC-10聚集體的可逆形成導致發射光從520nm(即JC-10單體形式的發射)向570nm(即J-聚集體形式的發射)的移動。當在490nm處激發時,隨著線粒體膜變得更加極化,JC-10的顏色從綠色橙色可逆地變為綠色橙色。使用通常安裝在所有流式細胞儀中的過濾器可以檢測兩種顏色??梢栽跓晒馔ǖ?(FL1)中分析綠色發射,在通道2(FL2)中分析綠色橙色發射。除了用于流式細胞儀外,它還可用于熒光成像和熒光微孔板平臺。這種Cell Meter 線粒體膜電位檢測試劑盒使研究人員能夠以酶標儀的形式運行JC-10檢測,并為監測線粒體膜電位變化提供了最強大的檢測方法。

這種Cell Meter JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒使研究人員能夠以酶標儀的形式運行JC-10檢測,并為監測線粒體膜電位變化提供了最可靠的檢測方法。該試劑盒基于陽離子親脂性JC-10染料檢測細胞中線粒體膜電位的變化。在正常細胞中,JC-10濃縮在線粒體基質中,在那里形成紅色熒光聚集體。然而,在凋亡和壞死細胞中,JC-10擴散出線粒體。它變成單體形式并以綠色熒光染色細胞。該試劑盒可用于篩選凋亡激活劑和抑制劑??梢砸苑奖愕?6孔和384孔熒光微量滴定板形式進行測定。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商,為您提供最優質的線粒體膜電位熒光探針。

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適用儀器


流式細胞儀  
激發: 488nm激光
發射: 530/30 nm, 575/26 nm濾波片
通道: FITC,PE通道


產品說明書

96孔板樣品分析

概述

用密度為5×105到1×106個細胞/ mL的測試化合物制備細胞

用500μL1XJC-10染料加載溶液重懸細胞(2-5×105細胞/管)

37°C孵育/ 室溫15-30分鐘

用流式細胞儀分析FL1通道(綠色熒光單體信號)和FL2通道(橙色熒光聚合信號)

 

操作方法

1.準備細胞:
以5×105至1×106個細胞/ mL的密度制備細胞。
注意:應根據個體評估每個細胞系,以確定誘導細胞凋亡的最佳細胞密度。

 

2.準備JC-10染料加載溶液:
2.1使用前在室溫下清洗所有試劑盒中的試劑。
2.2將25μL的200X JC-10(組分A)加入5mL的測定緩沖液(組分B)中,并充分混合。
注意:將未使用的200X JC-10(組分A)等分并保存在-20℃。 避免反復凍/融循環。

 

3.運行JC-10測定:
3.1用測試化合物細胞培養所需的一段時間以誘導細胞凋亡。設置并行控制實驗。
對于陰性對照:僅用載體處理細胞。
對于陽性對照:在37℃,5%CO2培養箱中用2-10μM的FCCP或CCCP處理細胞15至30分鐘。
注意:CCCP或FCCP可與JC-10染料加載溶液同時添加(來自步驟2.2)??赡苄枰味–CCP或FCCP以獲得具有單個細胞系的最佳結果。
3.2離心細胞,每管2-5×105個細胞。
注意:對于貼壁細胞,用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞攝入,用含有血清的培養基洗滌細胞一次,然后用JC-10染料加載溶液孵育(參見步驟3.3)。
3.3在500μLJC-10染料加載溶液中重懸細胞(來自步驟2.2)。
3.4在室溫下或在37℃,5%CO2培養箱中孵育染料裝載細胞15-60分鐘,避光。
注意:適當的孵育時間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。
3.5通過在FL1通道中使用流式細胞儀檢測熒光強度,獲得綠色熒光單體信號(在凋亡細胞中),并使用FL2通道檢測橙色熒光聚集信號(在健康細胞中)。建議使用FCCP或CCCP處理的細胞進行補償校正(見附錄)。

 

數據分析

1.在活的非凋亡細胞中,JC-10作為細胞溶質染色綠色中的單體存在,并且還在線粒體染成紅色的聚集體中積累。 在凋亡細胞和死細胞中,JC-10僅以單體形式存在,染色細胞溶質綠。
2.使用FL2通道可檢測到健康細胞中含有紅色JC-10聚集體的線粒體。 通過使用FL1通道(FITC)可檢測凋亡細胞中的綠色JC-10單體。
3. FL1與FL2的強度比用于監測化合物處理誘導的線粒體膜電位變化。

圖1. FCCP誘導的JurKat細胞線粒體膜電位變化的影響。 將JurKat細胞染色載有JC-10染料加載溶液以及DMSO(Top)或5μMFCCP(低)10分鐘。 使用FL1和FL2通道,用FACSCalibur(Becton Dickinson,San Jose,CA)流式細胞儀測量J-聚集體和單體形式JC-10的熒光強度。 將未補償的數據(左欄)與補償數據(右欄)進行比較。

 

參考文獻

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Journal: Ginekologia Polska (2017): 372--378

 

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產品名稱 貨號
Cell Meter JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 適合微孔板檢測 Cat#22800


說明書
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