活性氧 Cell Meter 熒光法線粒體超氧化物活性檢測試劑盒

Cell Meter 線粒體過氧化物活性檢測試劑盒 綠色熒光 是美國AAT Bioquest生產的用于檢測線粒體的試劑盒，線粒體是細胞超氧化物的主要生產者。低至中等水平的超氧化物的產生對于許多基本細胞過程的適當調節是至關重要的，包括基因表達，信號轉導和肌肉適應耐力運動訓練。不受控制的線粒體超氧化物產生可引發細胞氧化損傷，其導致多種疾病的發病機理，包括癌癥，心血管疾病，神經退行性疾病和衰老。細胞內線粒體超氧化物的檢測對于理解適當的細胞氧化還原調節及其失調對各種病理的影響非常重要。Cell Meter 熒光細胞內超氧化物檢測試劑盒使用我們獨特的超氧化物指示劑MitoROS 520來量化活細胞中的超氧化物水平.MitoROS 520具有細胞滲透性，能夠快速，有選擇地檢測線粒體中的超氧化物。它在與超氧化物反應時產生綠色熒光，并且在Ex / Em = 490 / 520nm處可以容易地讀取所得熒光。Cell Meter 熒光線粒體超氧化物活性測定試劑盒提供靈敏的一步熒光測定法，用于檢測活細胞中的線粒體超氧化物，孵育1小時。該試劑盒可用于流式細胞儀和熒光顯微鏡應用。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供最優質的Cell Meter 線粒體過氧化物活性檢測試劑盒。 

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活性氧（ROS）篇：包含總ROS和多種活性氧離子檢測試劑大全

樣本實驗方案

概述

適用于熒光顯微鏡：

1.在生長培養基中制備細胞

2.用測試化合物處理細胞以誘導超氧化物

3.添加MitoROS™520工作解決方案

4.將細胞在37°C染色60分鐘

5.監測Ex / Em = 490 / 530nm處的熒光增加

適用于流式細胞儀：

1.在生長培養基中制備細胞

2.用測試化合物處理細胞以誘導超氧化物

3.在37°C下染色細胞60分鐘

4.用流式細胞儀監測熒光強度

操作步驟

對于熒光顯微鏡/ 96孔微孔板：

1.用10μL10X測試化合物（96孔板）或5μL5X測試化合物（384孔板）在培養基或所需緩沖液（例如PBS或HHBS）中處理細胞。 對于對照孔（未處理的細胞），加入相應量的化合物緩沖液。

2.為了誘導超氧化物，將細胞在37℃下孵育一段所需的時間，避光。

注意：我們用5μM抗霉素A（AMA）在37°C處理RAW 264.7巨噬細胞2小時以誘導超氧化物。 

3.將100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的MitoROS™520工作溶液加入到細胞板中。

4.將細胞在37°C孵育1小時，并使用熒光顯微鏡和FITC過濾器拍攝圖像。

對于流式細胞儀：

1.根據需要處理細胞。

2.為了誘導超氧化物，將細胞在37℃下孵育一段所需的時間，避光。

注意我們用50μM抗霉素A（AMA）在37℃處理Jurkat細胞2小時以誘導超氧化物。

3.將1μL/ 0.5 mL MitoROS™520原液（500X）細胞加入細胞中。

4.將細胞在5％CO 2,37℃培養箱中孵育1小時，并使用FITC通道中的流式細胞儀監測熒光強度（Ex / Em = 488 / 530nm）。

參考文獻

Comparison of the detrimental features of microglia and infiltrated macrophages in traumatic brain injury: A study using a hypnotic bromovalerylurea
Authors: Naoki Abe, Mohammed E Choudhury, Minori Watanabe, Shun Kawasaki, Tasuku Nishihara, Hajime Yano, Shirabe Matsumoto, Takehiro Kunieda, Yoshiaki Kumon, Toshihiro Yorozuya
Journal: Glia (2018)

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