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Cell Meter 熒光法細胞周期檢測試劑盒 紅色熒光 適合于流式細胞檢測

貨號22842存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格100 Tests價格2544
Ex (nm)537Em (nm)618
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

我們的Cell Meter 檢測試劑盒是一套用于檢測細胞活力和增殖的工具。有多種參數可用于監測細胞活力和增殖。在正常細胞中,DNA密度根據細胞的生長,分裂,靜止執行其正常功能而變化。細胞周期的進程受各種細胞周期調節因子之間復雜的相互作用控制。這些調節劑激活轉錄因子,該轉錄因子與DNA結合并開啟或關閉導致細胞分裂的蛋白質的產生。這種調節級聯中的任何失誤都會導致異常細胞增殖,這是許多病理狀況(例如腫瘤形成)的基礎?;罴毎芯康臐撛趹檬谴_定細胞DNA含量和細胞周期分布,以檢測生長模式的變化,檢測凋亡,評估腫瘤細胞的行為和抑制基因的機制。該特定試劑盒旨在使用Nuclear Red CCS1(固定細胞中的細胞周期染色劑)檢測細胞周期進程和增殖。染料穿過透化的膜并插入細胞DNA中。試劑盒中提供的RNase降解RNA后,Nuclear Red CCS1的信號強度與DNA含量成正比??梢允褂昧魇郊毎麅x(FL2通道)檢測給定樣品中處于G0 / G1,S和G2 / M期的細胞百分比,以及處于凋亡之前的sub-G1期的細胞百分比。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的Cell Meter 熒光法細胞周期檢測試劑盒。

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適用儀器


流式細胞儀  
激發: 488nm激光
發射: 610/20nm濾波片
通道: PE-Texas Red通道


產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

  1. 用5×105至1×106cell/ mL的密度制備含測試化合物的細胞
  2. 用70%乙醇固定細胞
  3. 將0.5 µL 100X Nuclear Red CCS1和5 µL RNase A加入0.5 mL細胞溶液中
  4. 在室溫下孵育30-60分鐘
  5. 使用帶有FL2通道的流式細胞儀分析細胞

 

實驗步驟

1.用測試化合物處理細胞,以誘導凋亡或其他細胞周期功能。

2.對于每個樣品,用0.5 mL PBS制備細胞,密度為5×105至1×106細胞/ mL。

2.1對于貼壁細胞:將細胞用胰蛋白酶消化,懸浮在10%FBS培養基中,離心(1000 rpm,5分鐘),然后將沉淀重懸于PBS中。

2.2對于懸浮細胞:將細胞離心(1000 rpm,5分鐘),并將沉淀物懸浮在PBS(1 mL)中。 注意:應單獨評估每種細胞系,以確定誘導凋亡的最佳細胞密度。

3.用70%乙醇固定細胞:

3.1將0.5 mL細胞懸液吸移至1.2 mL無水乙醇中(最終濃度約為70%)。

3.2在冰上孵育細胞至少2小時(或在-20°C過夜)。在染色之前,細胞可以在-20°C下保存2年。注意:在用單克隆抗體染色細胞表面抗原后,通常將乙醇用于固定,而在用單克隆抗體染色細胞內抗原后,通常將甲醇用于固定。在此過程中,將固定并分析整個細胞。由于仍然存在整個細胞團,因此通常包括使用RNase來消除任何雙鏈RNA。盡管已經對整個細胞進行了分析,但嘗試檢測與DNA結合的某些細胞內抗原的嘗試可能會失敗,因為蛋白質會從透化的細胞中漏出(例如綠色熒光蛋白)。在這些情況下,在酒精固定之前,用PBS中的1%低聚甲醛進行短暫的預固定(在4-6°C下10分鐘),將有助于將蛋白質保留在細胞中。

4.用Nuclear Red CCS1染色細胞:

4.1以1000 rpm的速度沉淀細胞5分鐘,并用冷PBS至少洗滌一次。

4.2將沉淀物懸浮在0.5 mL測定緩沖液(組分C)中。

4.3加入5 µL 100X Nuclear Red CCS1(組分A)和5 µL 100X RNase A(組分B)。

4.4在室溫下孵育細胞30至60分鐘。 注意:適當的孵育時間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。 優化每個實驗的孵育時間。

4.5可選:將細胞以1000 rpm離心5分鐘,然后將細胞重懸于0.5 mL檢測緩沖液(組分B)或自備緩沖液中。

4.6使用FL2通道(Ex / Em = 490/620 nm),通過流式細胞儀檢測熒光強度。 

 

參考文獻 

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說明書
Cell Meter 熒光法細胞周期檢測試劑盒 紅色熒光 適合于流式細胞檢測 .pdf


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