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Cell Meter?固定細胞和組織TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒*紅色熒光*

貨號22853存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格25 Tests價格4884
Ex (nm)544Em (nm)570
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Cell Meter TUNEL細胞凋亡測定試劑盒是一個強大的工具,可方便地檢測由DNA片段化引起的細胞凋亡。該測定是非放射性且快速的。TUNEL測定法使用末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)催化TMR-dUTP在片段DNA的游離3'-羥基末端的摻入。通過熒光顯微鏡(Cy3或TRITC濾光片組)分析所得的TMR標記的DNA。它的紅色發射可以方便地與GFP標記的靶標多路復用。熒光TMR標記的核苷酸的直接摻入可顯著減少測試步驟。該試劑盒經過優化,可檢測固定細胞和福爾馬林固定,石蠟包埋的組織切片中的凋亡。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的細胞凋亡檢測試劑/試劑盒。 

 

適用儀器


流式細胞儀  
激發: 488nm激光
發射: 575/26nm濾波片
通道: PE通道
熒光顯微鏡  
激發: Cy3濾波片組
發射: Cy3濾波片組
推薦孔板: 黑色透明
 


產品說明書

樣品分析方案

概述

根據需要處理樣品

在冰上用4%甲醛溶液固定細胞30分鐘

在冰上用70%冰冷的乙醇透化細胞60分鐘

將TdT染色溶液添加到樣品中并在37°C下孵育60分鐘

使用帶有Cy3濾光片組的熒光顯微鏡檢測熒光強度 

 

工作溶液配制方案

TdT染色液

對于1test,混合以下試劑以使總體積為51 µL;
45 µL TdT反應緩沖液(組分D)
5 µL CoCl 2  (組分C)
0.5 µL TF5-dUTP(組分B)
0.5 µL TdT酶(組分A)。
注意:TdT染色溶液應立即使用。

 

操作步驟

  1. 根據需要處理樣品。
  2. 用您選擇的緩沖液(例如含Ca +2和Mg +2的 PBS)洗滌細胞。
  3. 通過在PBS中加入100 µL 4%多聚甲醛固定細胞,并在冰上孵育30分鐘。
  4. 除去固定液并用PBS洗滌細胞。
  5. 向細胞中加入100 µL 70%的冰冷乙醇,并在冰上孵育60分鐘。
    注意:在使用前,可將細胞在此步驟中于-20°C存放幾天。
  6. 除去酒精并用PBS洗滌細胞。
    注意:對于陽性對照,將固定細胞與2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca +2和Mg +2的PBS中于37°C 孵育60分鐘。除去DNAse并徹底清洗細胞,然后繼續執行其余的操作步驟。
  7. 向細胞中加入50 µL TdT染色溶液,并在37°C下孵育60至120分鐘。
  8. 除去TdT工作溶液,并用PBS洗滌細胞。
  9. 將細胞重懸于PBS中,并使用575/26 nm濾光片(PE通道)通過流式細胞儀或帶有Cy3濾光片組的熒光顯微鏡檢測熒光強度。 

 

組織染色方案

去石蠟和水化方案

  1. 通過將載玻片在Coplin廣口瓶中在室溫下浸入新鮮的二甲苯中5分鐘,從而對組織切片(附著在載玻片上)進行脫蠟。再重復一次。(共2次洗滌)
  2. 將載玻片在室溫下在Coplin廣口瓶中浸入100%乙醇中5分鐘,以洗滌樣品。
  3. 通過在室溫下將載玻片浸入各種濃度的酒精(100%,95%,85%,70%,50%)中,然后分別在室溫下浸沒5分鐘,使樣品重新水化。
  4. 在室溫下將載玻片浸入0.85%NaCl中5分鐘,以洗滌樣品。
  5. 在室溫下將載玻片浸入PBS中5分鐘,以洗滌樣品。重復一遍。(共2次洗滌) 

 

固定方案

  1. 通過在室溫下將載玻片浸入PBS中的4%多聚甲醛溶液中15-20分鐘來固定組織切片。
  2. 在室溫下將載玻片浸入PBS中5分鐘,以洗滌樣品。重復一遍。(共2次洗滌)
  3. 除去液體,然后將載玻片放在平坦的表面上。用100 µL 20 µg / mL蛋白酶K溶液處理組織切片。添加足夠覆蓋整個組織表面。在室溫下孵育載玻片10分鐘。
  4. 在室溫下將載玻片浸入PBS中5分鐘,以洗滌樣品。
  5. 通過在室溫下將載玻片浸入PBS中的4%多聚甲醛溶液中15-20分鐘來固定組織切片。
  6. 在室溫下將載玻片浸入PBS中5分鐘,以洗滌樣品。重復一遍。(共2次洗滌) 

 

染色方案

  1. 可選:對于陽性對照,將固定的樣品與2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca +2  和Mg +2的PBS中于37°C 孵育60分鐘。除去DNAse,并用PBS徹底清洗細胞,并繼續進行其余操作。
  2. 向樣品中加入50 µL TdT染色溶液,并在37°C下孵育60至120分鐘。
  3. 除去TdT工作溶液,并用PBS洗滌樣品。
  4. 加入含DAPI的封固劑(AAT Bioquest Cat#20005),并用Cy3濾光片組檢測熒光強度熒光顯微鏡。 

 

圖示

圖1. 用 HeLa細胞進行TUNEL分析的熒光圖像。固定HeLa細胞,并在37°C下分別使用及不使用DNAse處理60分鐘。然后將細胞用Cell Meter™固定細胞和組織TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒染色。DNA鏈斷裂在DNAse處理的細胞中表現出強烈的熒光染色。使用Cy3濾光片組在熒光顯微鏡下采集信號。

 

 

參考文獻

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說明書
Cell Meter?固定細胞和組織TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒*紅色熒光*.pdf


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