Cell Meter Caspase 9活性細胞凋亡檢測試劑盒 藍色熒光

Cell Meter Caspase 9活性細胞凋亡檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于細胞凋亡檢測的試劑盒，Cell Meter檢測試劑盒是一類用于檢測細胞功能的系列工具，包括細胞活性、細胞毒性、細胞凋亡、細胞膜電位以及細胞周期等方面的指標。每種檢測方案均能提供不同熒光顏色的檢測方案。這些高效的檢測方案為從多角度研究細胞功能活動提供了一種十分有效的方法。Cell Meter Caspase 9活性細胞凋亡檢測試劑盒 *藍色熒光* 是通過測量Caspase 9的活性而用于細胞凋亡檢測的。Caspase 9是CED-3亞家族中的一員?；罨腃aspase 9能切割下游caspases,例如caspase-3,-6和-7，起始Caspase級聯反應。在正常發育的中樞神經系統中，活化的Caspase 9是凋亡所必需的。Caspase 9具有底物的選擇性，其識別底物基序為Leu-Glu-His-Asp (LEHD)。本試劑盒利用Ac-LEHD-AMC作為熒光指示器來檢測caspas-9的活性。通過caspas-9的切割AMC產生強藍色熒光，eX/eM = 350/450 nm。這種特性使得試劑盒能適合于DAPI濾光器。本試劑盒提供所有必需組分。該實驗穩定、快速且適應高通量篩選的需求。它不僅能夠定量凋亡細胞中caspas-9的活性還能篩選caspas-9的抑制劑。很多實驗室利用本試劑盒進行高通量抑制劑的篩選。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供最優質的Cell Meter Caspase 9活性細胞凋亡檢測試劑盒。 

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樣品實驗分析

簡要概述

用測試化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制備細胞
加入等體積的Caspase 9工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
在室溫下孵育30-60分鐘
監測Ex / Em = 375/435 nm處的熒光（截止= 420 nm）

工作溶液配制

將50μLCaspase9底物（組分A）加入10mL測定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備Caspase 9工作溶液。 避光。有關細胞樣品制備的指南，請點擊查看。

操作步驟

1.通過將10μL/孔的10X測試化合物（96孔板）或5μL/孔的5X測試化合物（384孔板）加入PBS或所需緩沖液中來處理細胞。對于空白孔（沒有細胞的培養基），加入相同量的化合物緩沖液。

2.將細胞板在5％CO₂,37℃培養箱中孵育所需的一段時間（對于用星形孢菌素處理的Jurkat細胞，4-6小時）以誘導細胞凋亡。

3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 9工作溶液。

4.將Caspase 9工作溶液板在室溫下孵育至少1小時，避光。注意：如果需要，在室溫下加入Caspase 9工作溶液前10分鐘，向選定的樣品中加入1μL的1 mM Ac-LEHD-CHO caspase 9抑制劑，以確認對胱天蛋白酶9樣活性的抑制作用。

5.將細胞板（特別是非貼壁細胞）以800rpm離心2分鐘。

6.用熒光酶標儀在Ex / Em = 375 / 435nm（截止= 420nm）下監測熒光強度。

數據分析

參考文獻

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