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Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒 紅色熒光

貨號22816存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格100 Tests價格2544
Ex (nm)532Em (nm)619
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于細胞凋亡檢測的試劑盒,Cell Meter檢測試劑盒是一類用于檢測細胞功能的系列工具,包括細胞活性、細胞毒性、細胞凋亡、細胞膜電位以及細胞周期等方面的指標。每種檢測方案均能提供不同熒光顏色的檢測方案。這些高效的檢測方案為從多角度研究細胞功能活動提供了一種十分有效的方法。Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒 藍色熒光 是通過測量Caspase 8的活性而用于細胞凋亡檢測的。Caspase 8 是一種Caspase蛋白,CASP8基因所編碼。在神經元變性疾病中,例如亨廷頓綜合癥,caspase 8扮演著重要角色。Caspase 8已被證明具有底物選擇性,其肽基序為Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。該試劑盒使用(Ac-IETD)2- ProRed 作為熒光指示器來檢測caspas-8的活性。通過caspas-8的切割 ProRed 肽產生強藍色熒光(eX/eM = 530/620 NM)。這種特性使得試劑盒能適合于DAPI濾光器。本試劑盒提供所有必需組分和最佳操作流程。該實驗結果穩定,快速且適應高通量篩選。它不僅能夠定量凋亡細胞中caspas-8的活性還能篩選caspas-8的抑制劑。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒。 

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適用儀器


熒光酶標儀  
激發: 540nm
發射: 620nm
cutoff: 610nm
推薦孔板: 黑色透明
讀取模式: 頂或底讀模式


產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

1.用測試化合物(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)制備細胞
2.加入等體積的Caspase 8工作溶液(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)
3.在室溫下孵育1小時
4.在Ex / Em = 535/620 nm(截止= 610 nm)監測熒光強度(頂部或底部讀取模式)

 

儲存溶液配制

        除非另有說明,否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣,并在制備后儲存在-20°C。 避免反復凍融循環。
1. Ac-IETD-ProRed 原液(200X):
將65μLDMSO加入到Ac-IETD-ProRed (組分A)的小瓶中并充分混合以制備200X Ac-IETD-ProRed 儲備溶液。避光。

 

工作溶液配制

將50μL的200X Ac-IETD-ProRed 儲備溶液加入10mL的分析緩沖液(組分B)中并充分混合以制備Caspase 8工作溶液。 避光。 注意:Caspase 8工作液不穩定,請及時使用。有關細胞樣品制備的指南,請點擊查看。

 

操作步驟

1.通過將10μL/孔的10X測試化合物(96孔板)或5μL/孔的5X測試化合物(384孔板)加入PBS或所需緩沖液中來處理細胞。對于空白孔(沒有細胞的培養基),加入相同量的化合物緩沖液。

2.將細胞板在37℃,5%CO2培養箱中孵育所需的一段時間(對于用星形孢菌素處理的Jurkat細胞3-4小時)以誘導細胞凋亡。

3.加入100μL/孔/ 96孔或25μL/孔/ 384孔板的Caspase 8工作溶液。

4.將板在室溫下孵育至少1小時,避光。注意:如果需要,在室溫下加入Caspase 8工作溶液10分鐘前,向選定的樣品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制劑,以確認對caspase 8樣活性的抑制作用。

5.在Ex / Em = 535 / 620nm(截止= 610nm)下用熒光酶標儀(頂部或底部讀取模式)監測熒光強度。注意:有時,如果使用底部讀取模式,底部讀數可提供更好的信號與背景比,離心細胞板(特別是非粘附細胞)在800 rpm下2分鐘。

 

數據分析

圖1.使用Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒檢測Jurkat細胞中的Caspase 8活性 紅色熒光 。 在Costar黑壁/透明底96孔板中以相同的一天以200,000個細胞/90μL/孔接種Jurkat細胞。 用或不用1μM星形孢菌素處理細胞5小時。 加入半胱天冬酶8工作溶液(100μL/孔)并在室溫下溫育1小時。 使用FlexStation熒光酶標儀(Molecular Devices)在Ex / Em = 540 / 620nm(截止值= 610nm)下測量熒光強度。

 

參考文獻

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Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒 藍色熒光 Cat#22812
Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒 綠色熒光 Cat#22798
Cell Meter Caspase 9活性細胞凋亡檢測試劑盒 綠色熒光 Cat#22799


說明書
Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒 紅色熒光 .pdf


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