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Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒 綠色熒光 適合于流式細胞檢測

貨號22823存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格100 Tests價格2544
Ex (nm)503Em (nm)525
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于細胞凋亡檢測的試劑盒,Cell Meter檢測試劑盒是一類用于檢測細胞功能的系列工具,包括細胞活性、細胞毒性、細胞凋亡、細胞膜電位以及細胞周期等方面的指標。每種檢測方案均能提供不同熒光顏色的檢測方案。這些高效的檢測方案為從多角度研究細胞功能活動提供了一種十分有效的方法。Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒是通過測量Caspase 3/7的活性而用于細胞凋亡檢測的。因為Caspase-3 (CPP32/apopain)在細胞凋亡的起始過程中發揮著重要作用,因此其作為一個值得信賴的細胞凋亡指示劑廣泛地被大家所接受。Caspase 3具有特異性的底物多肽識別序列,即天冬氨酸-谷氨酸-纈氨酸-天冬氨酸(DEVD)。本試劑盒用TF2-DEVD-FMK作為熒光指示劑,用于Caspase-3/7活性的檢測。TF2-DEVD-FMK具有細胞滲透性、無細胞毒性,在凋亡細胞中能與活化的casepase-3/7進行不可逆的結合。一旦與Caspases結合,這種綠色熒光染料會被保留在細胞中。這種結合可以阻止Caspases進一步的催化作用,但是不會使細胞凋亡的進程停止。這種試劑將在添加介質之后的15分鐘內與有活性的Caspase酶進行反應。本試劑盒提供所有必需組分和最佳檢測方案。它用來對凋亡細胞中絕大多數活化的Caspases的活性進行定量檢測,或者用來篩選Caspases抑制劑。這種綠色熒光可以通過流式細胞儀對被激活的Caspases進行直接檢測。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒。 

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適用儀器


流式細胞儀  
激發: 488nm激發
發射: 530/30nm濾波片
通道: FITC通道


產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

1.用測試化合物制備細胞,密度為5×105至1×106個細胞/ mL
2.將1μL500XTF2-DEVD-FMK加入0.5mL細胞溶液中
3.在37°C,5%CO2培養箱中孵育1-4小時
4.將細胞沉淀并將細胞重懸于0.5mL測定緩沖液或生長培養基中
5.使用具有FL1通道的流式細胞儀分析細胞

 

操作步驟

1.對于每個樣品,準備細胞在0.5 mL溫熱培養基或您選擇的緩沖液中,密度為5×105至1×106個細胞/ mL。注意:應對每個細胞系進行單獨評估,以確定誘導細胞凋亡的最佳細胞密度。

2.用測試化合物處理細胞一段所需的時間以誘導細胞凋亡,并產生陽性和陰性對照。

3.將1μL500XTF2-DEVD-FMK(組分A)加入處理過的細胞中。

4.將細胞在37°C,5%CO2培養箱中孵育1-4小時。注意:對于貼壁細胞,用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整,并在用TF2-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培養基洗滌細胞一次。適當的孵育時間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。

5.將細胞洗滌并旋轉兩次。將細胞重懸于0.5mL測定緩沖液或生長培養基中。注意:TF2-DEVD-FMK是熒光的;因此,清除任何未結合的試劑以去除背景是很重要的。

6.用DNA染色標記細胞(如碘化丙錠或7-AAD用于死細胞)。

7.使用具有FL1通道的流式細胞儀(Ex / Em = 490 / 525nm)監測熒光強度。

 

數據分析

圖1.使用Jurkat細胞中的Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒檢測caspase 3/7活性。 加入喜樹堿誘導TF2-DEVD-FMK熒光強度。 將Jurkat細胞在37℃,5%CO2培養箱中不用(藍色)或用20μM喜樹堿(紅色)處理4-5小時,然后用TF2-DEVD-FMK染色1小時。

 

參考文獻

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Authors: Fang Ye, Xiaoyi Li, Lili Li, Jing Yuan, Jun Chen
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產品名稱 貨號
Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒 藍色熒光 Cat#22795
Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒 綠色熒光 Cat#22796
Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒 紅色熒光 Cat#22797


說明書
Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒 綠色熒光 適合于流式細胞檢測 .pdf


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