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Cell Meter 細胞自噬檢測試劑盒 綠色熒光

貨號23002存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格200 Tests價格3840
Ex (nm)447Em (nm)553
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Cell Meter 細胞自噬檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于細胞自噬檢測的試劑盒,這種Cell Meter 自噬試劑盒采用Autophagy Green 作為特異性自噬體標志物來分析自噬的活性。該分析針對直接檢測分離和附著的細胞中的自噬進行了優化。該試劑盒提供了測定方案的所有必需組分。 Cell Meter 自噬試劑盒適用于熒光顯微鏡,熒光酶標儀和流式細胞儀。 Autophagy Green 具有Ex / Em = 447/553 nm的大斯托克斯位移。自噬是一種進化上保守的降解過程,其靶向長壽命蛋白質,細胞器和其他細胞質成分以通過溶酶體途徑降解。自噬途徑與通常降解短壽命蛋白質的遍在蛋白 - 蛋白酶體途徑的作用是互補的。自噬途徑的激活對于多種細胞作用是必需的,包括饑餓期間的存活,細胞內成分的清除,發育和免疫。在沒有壓力的情況下,自噬起到一種管家功能,去除受損害的細胞器和細胞成分,防止細胞毒性作用。就癌癥發展而言,自噬似乎扮演多重角色。某些自噬蛋白如Beclin-1和Bif-1的表達減少或缺失會增加小鼠的腫瘤易感性,而這些蛋白的過度表達可抑制癌細胞生長。然而,自體吞噬對于癌細胞在實體瘤的營養缺乏和缺氧核心中的存活至關重要。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的Cell Meter 細胞自噬檢測試劑盒。 

 

適用儀器


流式細胞儀  
激發: 488nm激光
發射: 530/30nm濾波片
通道: FITC通道
熒光顯微鏡  
激發: FITC濾波片
發射: FITC濾波片
推薦孔板: 黑色透明
熒光酶標儀  
激發: 485nm
發射: 530nm
cutoff: 515nm
推薦孔板: 黑色透明
讀取模式: 底讀模式


產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

1.用您的測試化合物準備細胞
2.添加Autophagy Green 工作溶液
3.在37°C孵育15-60分鐘
4.用洗滌緩沖液洗滌細胞
5.監測Ex / Em = 485 / 530nm處的熒光增加(截止= 515nm),使用FITC濾光片組的熒光顯微鏡或使用Ex / Em = 485 / 530nm通道的流式細胞儀

 

工作溶液配制

        將20μL的Autophagy Green (組分A)加入10 mL染色緩沖液(組分B)中并充分混合以制備Autophagy Green 工作溶液。 避光。 注意:對于一個96孔板,20μL的500X Autophagy Green (組分A)就足夠了。有關細胞樣品制備的指南,請點擊查看。

 

操作步驟

1.根據您的特異性誘導方案(約1-2×104個細胞/孔/ 96孔板)將細胞培養至最適于自噬誘導的密度。同時,對于每種標記條件,以與誘導群體相同的密度培養非誘導的陰性對照細胞群。

2.去除培養基。

3.向每個孔中加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Autophagy Green 工作溶液。

4.將細胞在37°C,5%CO2培養箱中孵育15至60分鐘。注意:適當的孵育時間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。

5.用洗滌緩沖液(組分C)洗滌細胞3-4次,然后向每個孔中加入100μL洗滌緩沖液(組分C)。注意:如果細胞看起來沒有充分染色,建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

6.用熒光酶標儀在Ex / Em = 485 / 530nm(截止= 515nm),具有FITC濾光器組的熒光顯微鏡或具有Ex / Em = 485 / 530nm通道的流式細胞儀監測熒光強度。

 

數據分析

圖1.自噬Green 標記的囊泡是由HeLa細胞中的饑餓誘導的。 將HeLa細胞在常規DMEM培養基(左:對照)或含有5%血清的1X HBSS緩沖液(右:自噬處理)中孵育16小時。 將對照和饑餓細胞與Autophagy Green 工作溶液一起在37℃,5%CO 2培養箱中孵育20分鐘,然后用洗滌緩沖液洗滌3次。 在具有FITC通道(綠色)的熒光顯微鏡下立即對細胞成像。 細胞核用Hoechst 33342(藍色)染色。

 

參考文獻

Coronarin D induces apoptotic cell death through the JNK pathway in human hepatocellular carcinoma
Authors: Hui-Wen Lin, Ming-Ju Hsieh, Chao-Bin Yeh, Kuan-Chun Hsueh, Yi-Hsien Hsieh, Shun-Fa Yang
Journal: Environmental toxicology (2018)

Methods for Measuring Autophagy Levels in Disease
Authors: Kanchan Phadwal, Dominic Kurian
Journal: (2017): 195--211

High glucose induces bone marrow-derived mesenchymal stem cell senescence by upregulating autophagy
Authors: Tzu-Ching Chang, Min-Fen Hsu, Kenneth K Wu
Journal: PloS one (2015): e0126537

Licochalcone A induces autophagy through PI3K/Akt/mTOR inactivation and autophagy suppression enhances Licochalcone A-induced apoptosis of human cervical cancer cells
Authors: Jen-Pi Tsai, Chien-Hsing Lee, Tsung-Ho Ying, Chu-Liang Lin, Chia-Liang Lin, Jung-Tsung Hsueh, Yi-Hsien Hsieh
Journal: Oncotarget (2015): 28851

 

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產品名稱 貨號
Cell Meter 細胞自噬檢測試劑盒 藍色熒光 Cat#23000


說明書
Cell Meter 細胞自噬檢測試劑盒 綠色熒光 .pdf


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