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Cell Meter 細胞自噬檢測試劑盒 藍色熒光

貨號23000存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格200 Tests價格2544
Ex (nm)333Em (nm)518
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Cell Meter 細胞自噬檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于檢測細胞自噬的試劑盒,自噬是一種進化上保守的降解過程,其靶向長壽命蛋白質,細胞器和其他細胞質成分,通過溶酶體途徑降解。自噬途徑與遍在蛋白 - 蛋白酶體途徑的作用互補,其通常降解短壽命蛋白質。多重細胞作用需要激活自噬途徑,包括饑餓期間的存活,細胞內組分的清除,發育和免疫。在沒有壓力的情況下,自噬具有管家功能,去除受損的細胞器和細胞成分,防止細胞毒性作用。自噬的減少和缺陷與多種疾病有關,例如Huntingtons,Alzheimers和Parkinsons。就癌癥發展而言,自噬似乎扮演著多重角色。某些自噬蛋白(如Beclin-1和Bif-1)的表達減少或缺失會增加小鼠的腫瘤易感性,而這些蛋白的過表達可抑制癌細胞的生長。然而,自噬對于實體瘤的營養不良和缺氧核心內的癌細胞的存活是至關重要的。 Cell Meter 自噬試劑盒使用Autophagy Blue 作為特異性自噬體標記來分析自噬的活性。該測定被優化用于直接檢測分離和附著細胞中的自噬。該試劑盒為分析方案提供了所有必需的組分。 Cell Meter 自噬試劑盒適用于熒光顯微鏡,熒光酶標儀和流式細胞儀。 Autophagy Blue 在Ex / Em = 333 / 518nm處具有熒光激發和發射。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的Cell Meter 細胞自噬檢測試劑盒。

 

適用儀器


熒光顯微鏡  
激發: DAPI通道
發射: DAPI通道
推薦孔板: 黑色透明
熒光酶標儀  
激發: 330nm
發射: 520nm
cutoff: 475nm
推薦孔板: 黑色透明
讀取模式: 底讀模式


產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

1.用測試化合物制備細胞,密度為1 - 2×104個細胞/孔
2.添加Autophagy Blue 工作溶液
3.在37°C孵育15-60分鐘
4.用洗滌緩沖液洗滌細胞
5.監測Ex / Em = 330 / 520nm處的熒光增加(截止= 475nm),使用DAPI濾光片組的熒光顯微鏡或使用Ex / Em = 330 / 520nm通道的流式細胞儀

 

工作溶液配制

將20μL500XAutophagy Blue (組分A)加入10 mL染色緩沖液(組分B)中并充分混合以制備Autophagy Blue 工作溶液。 避光。 注意:對于一個96孔板,20μL的500X Autophagy Blue (組分A)就足夠了。有關細胞樣品制備的指南,請點擊查看。

 

操作步驟

1.根據您的特異性誘導方案(約1-2×104個細胞/孔/ 96孔板)將細胞培養至最適于自噬誘導的密度。同時,對于每種標記條件,以與誘導群體相同的密度培養非誘導的陰性對照細胞群。

2.去除培養基

3.向每個孔中加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Autophagy Blue 工作溶液。

4.將細胞在37°C,5%CO2培養箱中孵育15至60分鐘。注意:適當的孵育時間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。

5.用洗滌緩沖液(組分C)洗滌細胞3-4次,然后向每個孔中加入100μL洗滌緩沖液(組分C)。注意:如果細胞看起來沒有充分染色,建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

6.用熒光酶標儀在Ex / Em = 330 / 520nm(截止= 475nm),具有DAPI濾光器組的熒光顯微鏡或具有Ex / Em = 330 / 520nm通道的流式細胞儀監測熒光強度。

 

數據分析

圖1.使用Cell Meter 自噬測定試劑盒在HeLa細胞中通過饑餓誘導自噬Blue 標記的囊泡。 將Hela細胞在作為對照(A)的常規DMEM培養基中或在血清耗盡的培養基中作為自噬處理(B)孵育16小時。 將對照細胞和饑餓細胞與Autophagy Blue 工作溶液一起在37℃,5%CO2培養箱中孵育30分鐘,然后用洗滌緩沖液洗滌四次。 在具有DAPI通道的熒光顯微鏡下立即對細胞成像。 通過自噬泡的亮藍點染色表明自噬(B)。

 

參考文獻

Sonodynamic therapy inhibits palmitate-induced beta cell dysfunction via PINK1/Parkin-dependent mitophagy
Authors: Tian Guo, Tianyang Liu, Yun Sun, Xianna Liu, Rongguo Xiong, He Li, Zhitao Li, Zhiguo Zhang, Zhen Tian, Ye Tian
Journal: Cell death & disease (2019): 457

Methods for Measuring Autophagy Levels in Disease
Authors: Kanchan Phadwal, Dominic Kurian
Journal: (2017): 195--211

High glucose induces bone marrow-derived mesenchymal stem cell senescence by upregulating autophagy
Authors: Tzu-Ching Chang, Min-Fen Hsu, Kenneth K Wu
Journal: PloS one (2015): e0126537

Licochalcone A induces autophagy through PI3K/Akt/mTOR inactivation and autophagy suppression enhances Licochalcone A-induced apoptosis of human cervical cancer cells
Authors: Jen-Pi Tsai, Chien-Hsing Lee, Tsung-Ho Ying, Chu-Liang Lin, Chia-Liang Lin, Jung-Tsung Hsueh, Yi-Hsien Hsieh
Journal: Oncotarget (2015): 28851

 

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產品名稱 貨號
Cell Meter 細胞自噬檢測試劑盒 綠色熒光 Cat#23002


說明書
Cell Meter 細胞自噬檢測試劑盒 藍色熒光 .pdf


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