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Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞增殖與活性檢測試劑盒

貨號TJ35001存儲條件 建議在低于-15℃溫度下冷凍保存
規格5ml價格590
Ex (nm)Em (nm)
分子量600.47溶劑Water
產品詳細介紹


簡要概述

        Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞增殖與活性檢測試劑盒是百螢生物生產的一種基于 WST-8 的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。其主要成分為水溶性四唑鹽 WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜(formazan)。WST-8 被細胞內脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養基中。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺;顏色的深淺與細胞的增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值,間接反映活細胞數量。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的熒光探針。 


  CCK-8法 MTT法 MTS法 SRB法 XTT法 WST-1法
溶解性 水溶 難溶 水溶 水溶 水溶 水溶
檢測波長 450nm 490nm 450nm 510nm 450nm 450nm
外觀 液體 固體 液體 液體 固體 液體
是否需要重新溶解 不需要 需要 不需要 需溶于Tris堿 需要 不需要
便捷性 +++ ++ +++ + ++ +++
檢測效率 ++++ + ++ + ++ ++
可重復性 +++ + ++ ++ + ++
穩定性 +++ + + +++ + ++

1.MTT法:MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。

2.MTS法:以生成有色化合物的顯色反應為基礎,比色分析對顯色反應的基本要求是:反應應具有較高的靈敏度和選擇性,反應生成的有色化合物的組成恒定且較穩定,它和顯色劑的顏色差別較大。選擇適當的顯色反應和控制好適宜的反應條件,是比色分析的關鍵。

3.SRB法:磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B,SRB)比色法,主要用來檢測細胞增殖情況。SRB是一種粉紅色陰離子染料,易溶于水,在酸性條件下可特異性地與細胞內組成蛋白質的堿性氨基酸結合;在510 nm左右波長下產生吸收峰,吸光值與細胞量成線性正相關,故可用作細胞數的定量檢測。

4.XTT法:XTT是一種與MTT類似的四唑氮衍生物,可被活細胞線粒體脫氫酶還原成水溶性的棕色甲肷產物,當XTT與電子偶合劑共同使用時,甲肷的生成量與細胞的增殖程度呈正相關。

5.WST-1法:WST-1是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的甲臜(Formazan)。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。WST-1是MTT的一種升級替代產品,和MTT或其它MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優點。

 

活力計算:
細胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)] ×100

A(加藥):具有細胞、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培養基和CCK8溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A(0加藥):具有細胞、CCK8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力

CCK-8實驗中的關鍵點(供參考):1.種板數;2.種板后細胞的貼壁生長時間;3.加藥后的孵育時間;4.CCK-8試劑加入量;5.CCK-8試劑加入后細胞孵育時間

 

 

產品特點

        本試劑盒提供了一種靈敏度高,操作簡便,使用安全的細胞增殖與活性檢測方法。與傳統的 MTT 實驗相比具有明顯的優勢:

 

1.MTT實驗生成的甲臜不是水溶性的,需要使用 DMSO 等有機溶劑溶解;而本方法產生的甲臜是水溶性的,不僅省去了溶解步驟,更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差。

2.與 MTT 方法相比,本方法線性范圍更寬,靈敏度更高。

3.本方法對細胞無毒性,可以多次測定,選取最佳測定時間。

4.本方法所用試劑在培養基中比 MTT 更加穩定,實驗結果重復性好。

5.MTT 具有毒性,同時其生成的甲臜需要有機溶劑溶解,會對操作人員身體造成危害。本試劑無毒,使用中無需有機溶劑,操作更加安全。

6.本試劑盒在 4°C 避光可長期保存,使用無需配制,即開即用。

 

        本試劑盒可以用于生物活性因子的活性檢測,抗腫瘤藥物的篩選,細胞增殖的測定,細胞毒性檢測以及藥敏等與細胞活性和增殖相關的實驗。本試劑盒使用方便,試劑盒包含一管已經配制好的含有 WST-8 的 CCK-8 溶液,即開即用,無需其他準備步驟。檢測過程也無需采用額外的步驟去溶解甲臜,可直接使用 96 孔板或者 384 孔板在酶標儀上檢測,適合大規模,高通量的樣品檢測。



產品說明書

實驗方案

1.在96 孔板中配置100μL的細胞懸液(通常細胞增殖實驗每孔加入100μL2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100μL5000個細胞。具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實驗需要,進行培養(在37°C,5%CO2的條件下)預培養24 小時。

2.向培養板加入1-10μL 不同濃度的待測藥物刺激。

3.將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6、12、24 或48 小時)。

4.每孔加入10μLCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD 值的讀數)。如果起始的培養體積為200μL,則需加入20μLCCK-8溶液,其它情況以此類推??梢杂眉恿讼鄳考毎囵B液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測,需設置加了相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。

5.在細胞培養箱內繼續孵育1-4小時,對于大多數情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。

6.用酶標儀測定在450nm處的吸光度,如無450nm濾光片,可以使用420-480nm的濾光片??梢允褂么笥?00nm的波長,例如650nm,作為參考波長進行雙波長測定。

7.如果暫時不測定OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。

注意:如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK 之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

 

注意事項:

1.由于使用96孔板進行檢測,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發的問題。一方面,由于96孔板周圍一圈最容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加PBS,水或培養液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。

2.CCK-8檢測細胞活性的原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應。任何待測體系中存在還原劑,例如一些抗氧化劑會干擾檢測,需設法去除。

3.建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。

4.建議采用多通道移液器,可以減少平行孔間的差異。加入CCK 試劑時,建議斜貼著培養板壁加,不要插到培養基液面下加樣,容易產生氣泡,會干擾OD 值讀數。

5.當使用標準96 孔板時,貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL培養基),且培養時間長一些。如果要使用24 孔板或6 孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。

6.加入CCK -8溶液時,如果細胞培養時間較長,培養基顏色已變化或pH值變化。建議換用新鮮的培養基。

7.如果沒有450nm 的濾光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片,但是450nm 濾光片的檢測靈敏度最高。

8.酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。

9.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

相關產品

品名 貨號 規格
細胞增殖WST-8檢測試劑 #15705/#15706/#15707 25mg/100mg/1g
Cell Meter 比色法WST-8細胞定量試劑盒 #22770/#22771 1000Tests/5000Tests

 

試劑應用文獻

Authors: Lilei Peng,Yang Ming,Ling Zhang,Jie Zhou,Wei Xiang,Shan Zeng,HaiPing He,Ligang Chen
Journal:FASEB JOURNAL (2020)
 
Authors: Haiyan Song, Yuxiang Zhang
Journal:ScienceDirect:Neurochemistry International (2020)
 
Authors: Xiongdong Zhong, Xianchang Yu, Xiaoyan Wen, Lei Chen,Ni Gu
Journal:Cancer Cell International (2020)
 
Authors: Xiaoyong Wei, Xiaolong You, Jianlong Zhang, Cuncai Zhou
Journal:Molecular Therapy: Nucleic Acid (2019)
 
Authors: Haiyan Song, Yuxiang Zhang
Journal:BMC Cancer (2018)




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