Amplite 熒光法谷胱甘肽檢測試劑盒 綠色熒光

Amplite 熒光法谷氨酸檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于檢測谷氨酸的試劑盒，物系統中半胱氨酸的試劑和試劑盒很少，并且在為數不多的商業化半胱氨酸檢測試劑盒中存在靈敏度較低、操作較冗長等缺點。Amplite熒光法谷胱甘肽分析試劑盒 *綠色熒光*對樣品中谷胱甘肽提供超敏感實驗用于定量。這個試劑盒利用專有的無熒光染料通過與硫醇反應產生強熒光。本試劑盒提供敏感的一步熒光方法，并且在100 ul檢測體積中能檢測到1pmol的半胱氨酸或者谷胱甘肽。本試劑盒可以用于96或384微孔板分析，并且無需任何分步驟，就可以輕易地實現自動化。它的信號可以通過酶標儀在490／520nm處輕易地讀取。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供最優質的Amplite 熒光法谷胱甘肽檢測試劑盒。 

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備GSH工作溶液（50μL）
2.添加GSH標準品或測試樣品（50μL）
3.在室溫下孵育10至60分鐘
4.檢測Ex / Em = 490/525 nm處的熒光增加（cut off= 515 nm）

溶液制備

1.儲備溶液

1.1 GSH標準溶液（1 mM）：
將200μL測定緩沖液（組分B）加入到GSH標準品（組分C）的小瓶中以制備1mM（1nmol /μL）GSH標準溶液。

1.2 Thiolite Green原液（100X）：
將100μLDMSO（組分D）加入到Thiolite Green（組分A）的小瓶中以制備100X Thiolite Green原液。

2.標準溶液

2.1醛標準溶液

將30μL的1mM（1nmol /μL）GSH標準溶液加入到970μL的測定緩沖液（組分B）中以產生30μM（30pmol /μL）GSH標準溶液。 取30μM（30 pmol /μL）GSH標準溶液，進行1：3連續稀釋，得到用分析緩沖液（組分B）連續稀釋的GSH標準品（SD7-SD1）。 注意：稀釋的GSH標準溶液不穩定。 在4小時內使用。

3.工作溶液

將50μL 100XThiolite Green原液加入5 mL分析緩沖液（組分B）中，充分混合，制成GSH工作溶液。

點擊查看細胞樣品制備指南

樣品分析

表1.實心黑色96孔微孔板中GSH標準品和測試樣品的布局。 SD = GSH標準品（SD1  -  SD7,0.01至10μM）; BL =空白對照; TS =測試樣品

表2.每個孔的試劑組成

1.根據表1和2中提供的布局制備GSH標準品（SD），空白對照品（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25μL試劑代替50μL。 注意：根據需要處理細胞或組織樣本。

2.在GSH標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50μLGSH工作溶液，使總測定體積為100μL/孔。 對于384孔板，在每個孔中加入25μLGSH工作溶液，總體積為50μL/孔。

3.在室溫下孵育反應10至60分鐘，避光。

4.用熒光酶標儀在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下檢測熒光增加。

參考文獻

Comparison of different methods to study effects of silver nanoparticles on the pro-and antioxidant status of human keratinocytes and fibroblasts
Authors: Sebastian Ahlberg, Fiorenza Rancan, Matthias Epple, Kateryna Loza, David Höppe, Jürgen Lademann, Annika Vogt, Burkhard Kleuser, Christian Gerecke, Martina C Meinke
Journal: Methods (2016)

相關產品