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Amplite 熒光法Caspase 3/7活性檢測試劑盒 藍色熒光

貨號13502存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格500 Tests價格3840
Ex (nm)341Em (nm)441
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Amplite 熒光法Caspase 3/7活性檢測試劑盒 藍色熒光AAT Bioquest研發的用于檢測半胱天冬酶活性的試劑盒。半胱天冬酶在細胞凋亡和細胞信號傳導中起重要作用,而Caspase 3/7(CPP32 / apopain)的激活對于細胞凋亡的起始是重要的。 Caspase 3/7也被鑒定為藥物篩選靶標。半胱天冬酶抑制劑具有抗癌和其他藥理學潛力。已經證明Caspase 3/7對肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)具有底物選擇性。

我們的Amplite™熒光Caspase 3/7檢測試劑盒使用Ac-DEVD-AMC作為Caspase 3/7活性的熒光指示劑。AMC肽幾乎不發熒光。 Caspase 3/7對AMC肽的切割產生強熒光AMC,其在440-460nm下熒光監測,激發340-350nm。 它可用于使用熒光酶標儀或熒光計連續測量細胞提取物和純化酶制劑中Caspase 3/7的活性。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商,為您提供最優質的Caspase 檢測試劑/試劑盒。

 

適用儀器


熒光酶標儀  
激發: 350nm
發射: 450nm
cutoff: 420nm
推薦孔板: 黑色孔板


產品說明書

96孔板測定示例

 

概述

用測試化合物制備細胞(100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板)

加入等體積的Caspase 3/7測定溶液

在室溫下孵育1小時

監測Ex的熒光強度 / Em = 350 / 450nm

 

操作方法

1.準備細胞:

1.1對于貼壁細胞:在生長培養基中將細胞在20,000至80,000個細胞/孔/ 90L過夜,96孔板或5,000至20,000個細胞/孔/ 20L,用于384孔板。

1.2對于非粘附細胞:從培養基中離心細胞,然后將細胞沉淀懸浮于培養基中,培養基濃度為80,000至200,000細胞/孔/ 90L,用于96孔poly-D賴氨酸平板或20,000至50,000細胞/孔/ 20L用于384孔聚-D賴氨酸板。在實驗之前,在制動器關閉的情況下以800rpm離心板2分鐘。

注意:應對每個細胞系進行單獨評估,以確定誘導細胞凋亡的最佳細胞密度。

2.準備庫存解決方案:

2.1在使用前,在室溫下使用組分A,B,C(如果需要,組分D)。

2.2如果需要,制備1mM Caspase 3/7抑制劑Ac-DEVD-CHO儲備液:將100μLDMSO(未提供)直接加入到Caspase 3/7抑制劑Ac-DEVD-CHO小瓶中(組分D) )。該抑制劑可用于確認熒光信號強度與Caspase 3/7樣蛋白酶活性之間的相關性。

注意:應將未使用的抑制劑儲備液等分并在-20°C下干燥儲存。

3.準備Caspase 3/7檢測溶液:

將50μL200XCaspase 3/7底物儲備溶液(組分A)和100μL1MDTT溶液(組分C)加入10mL測定緩沖液(組分B)中,并充分混合。

注意:50μL的200X Caspase 3/7底物儲備液足以進行100次分析,每次分析的反應體積為100μL。未使用的200X Caspase 3/7底物儲備溶液應等分并在-20°C下干燥儲存。遠離光明。

4.運行Caspase 3/7測定:

4.1通過在PBS或所需緩沖液中加入10μL10X測試化合物(96孔板)或5μL5X測試化合物(384-板)來處理細胞。對于空白孔(沒有細胞的培養基),加入相應量的化合物緩沖液。

4.2將細胞板在37℃,5%CO 2培養箱中培養所需的一段時間(用喜樹堿處理的Jurkat細胞4-6小時)以誘導細胞凋亡。

4.3加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Caspase 3/7測定溶液(來自步驟3)。

4.4在室溫下孵育板至少1小時,避光。

注1:如果需要,在室溫下加入測定溶液10分鐘前,將1L Caspase 3/7抑制劑Ac-DEVD-CHO的1mM儲備液(來自步驟2.2)加入所選樣品,以確認caspase 3 / 7個類似的活動。

4.5在制動器關閉的情況下,以800rpm離心細胞板(特別是對于非貼壁細胞)2分鐘。

4.6在Ex / Em = 350 / 450nm處觀察熒光增加。

 

數據分析

        從具有細胞的那些孔的值中減去具有生長培養基的空白孔中的熒光??瞻卓椎谋尘盁晒飧鶕L培養基或微量滴定板的來源而變化。

圖1. Jurkat細胞中Caspase 3/7活性的檢測。 Jurkat細胞在同一天以80,000個細胞/孔/ 90L在黑色壁/透明底96孔Costar平板中接種。 用或不用20M喜樹堿處理細胞5小時。 加入半胱天冬酶3/7測定溶液(100μL/孔)并在室溫下溫育1小時。 使用NOVOStar儀器(來自BMG Labtech)在Ex / Em = 350 / 450nm下測量熒光強度。

 

參考文獻

The use of tail-anchored protein chimeras to enhance liposomal cargo delivery
Authors: Abbi Abdelrehim, Lior Shaltiel, Ling Zhang, Yechezkel Barenholz, Stephen High, Lynda K Harris
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Identification of an allosteric small-molecule inhibitor selective for the inducible form of heat shock protein 70
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說明書
Amplite 熒光法Caspase 3/7活性檢測試劑盒 藍色熒光 .pdf


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