iFluor 680 Styramide * Alexa Fluor 680酪胺的優異替代品*

貨號45050存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格100 Slides價格3840
Ex (nm)684Em (nm)701
分子量1151.28溶劑DMSO
產品詳細介紹


簡要概述

Power Styramide 信號放大(PSA)系統是可以檢測細胞和組織中極低豐度靶標最靈敏的方法之一,其熒光信號強度比廣泛使用的tyramide(TSA)試劑高10-50倍。當與iFluor 染料結合使用時,iFluor 染料標記的Styramide 綴合物可以產生比標準ICC 更高精度和靈敏度(超過100倍)的熒光信號。PSA利用辣根過氧化物酶(HRP)來催化活性原位共價沉積熒光團,PSA自由基的反應性比酪酰胺自由基高得多,這使PSA系統比傳統的TSA試劑更快,更耐用,更靈敏。與酪酰胺試劑相比,Styramide 綴合物具有更高效率標記靶標的能力,因此產生更高的熒光信號。與標準直接偶聯法或酪酰胺擴增相比、與相同水平的敏感性相比,Styramide 偶聯物還可以明顯減少一級抗體的消耗。iFluor 680 Styramide是Alexa Fluor 680酪酰胺或其他光譜相似的熒光酪酰胺綴合物或TSA試劑的優良替代品。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的iFluor 680 Styramide。

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適用儀器


熒光顯微鏡  
激發: Cy5濾波片組
發射: Cy5濾波片組
推薦孔板: 黑色透明
濾波片: Cy5濾波片組


產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

  1. 修復/透化細胞或組織
  2. 在封閉緩沖液中添加一抗
  3. 加入結合HRP的二抗
  4. 準備Styramide工作溶液,并在室溫下添加到細胞或組織中(5-10分鐘)

 

溶液配制

儲備溶液配制

1.Styramide 儲備溶液(100X):將100 µL DMSO加入iFluor 染料標記的含有Styramide 綴合物的小瓶中,制成100X Styramide 儲備溶液。注意:一次性使用等分試樣,并將未使用的100X儲備溶液在2-8 的冰箱避光保存,并避免重復凍融循環。

2.H2O2儲備溶液:將90 µL的ddH2O加入10 µL 3%過氧化氫中(未提供)。注意:在使用當天準備新鮮的100X H2O2溶液,做到現用現配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液(1X):每1 mL反應緩沖液需要10 µL Styramide 儲備溶液和10 µL H2O2儲備溶液。注意:蓋玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液,(提供的Styramide 足以進行100次測試。)注意:必須在制備后2小時內使用Styramide 工作溶液,并避免直接暴露在光線下。

2.二級抗體-HRP工作溶液:根據所使用的二抗說明書中的建議配制適當濃度的二級抗體-HRP工作溶液。

 

實驗步驟

(該步驟適用于細胞或組織染色)

細胞固定和透化

1.在室溫下用3.7%甲醛或低聚甲醛的PBS固定細胞或組織20分鐘。

2.用PBS沖洗細胞或組織兩次。

3.在室溫下用0.1%Triton X-100溶液透化細胞1-5分鐘。

4.用PBS沖洗細胞或組織兩次。

 

組織固定,脫石蠟和補液

(根據標準IHC方案對組織進行脫蠟和脫水處理。根據實驗方案使用特定溶液進行抗原修復。)

 

過氧化物酶標記

1.可選:通過在過氧化物酶淬滅溶液(例如3%過氧化氫)中孵育細胞或組織樣品10分鐘來淬滅內源性過氧化物酶活性,然后在室溫下用PBS沖洗兩次。

2.可選:如果使用結合HRP的鏈霉親和素,建議通過生物素封閉緩沖液封閉內源性生物素。

3.在4°C下用封閉溶液(例如含1%BSA的PBS)封閉30分鐘。

4.除去封閉溶液,并添加稀釋好的一抗,在室溫下放置60分鐘或在4°C下放置過夜。

5.用PBS洗滌3次,每次5分鐘。

6.將100 µL二級抗體-HRP工作溶液添加到每個樣品中,并在室溫下孵育60分鐘。注意:孵育時間和濃度可以根據信號強度而變化。

7.用PBS洗滌3次,每次5分鐘。

 

Styramide標記

1.向每個樣品中添加100 µL Styramide 工作溶液,并在室溫下孵育5-10分鐘。 注意:如果您觀察到非特異性信號,則可以縮短Styramide的孵育時間。您應該在不同的孵育時間點使用陽性和陰性對照確定樣品的最佳孵育時間,或者您可以在工作溶液中使用較低濃度的Styramide。

2.用PBS沖洗3次。

 

復染和熒光成像

1.根據需要對細胞或組織樣本進行復染。AAT提供了一系列核復染色試劑,如表1所示。請按照試劑附帶的說明進行操作。

2.加上蓋玻片。

3.使用適當的濾波器觀察Styramide的熒光信號。

表1.建議用于核復染色的產品。 

貨號 產品名稱 Ex/Em(nm)
17548 核藍 DCS1 350/461
17550 核綠 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核紅 DCS1 642/660

 

圖示

圖1.Power Styramide 信號放大(PSA)系統是可以檢測細胞和組織中極低豐度的靶標最靈敏的方法之一,其熒光信號強度比廣泛使用的tyramide(TSA)試劑高10-50倍。與iFluor染料結合使用后具有更高熒光強度、更高的光穩定性和增強的水溶性,iFluor染料標記的Styramide綴合物可以產生比標準ICC /明顯更高的精度和靈敏度(超過100倍)的熒光信號。PSA利用辣根過氧化物酶(HRP)的催化活性原位共價沉積熒光團。PSA自由基的反應性比酪酰胺自由基高得多,這使PSA系統比傳統的TSA試劑更快,更耐用,更靈敏。

圖2.用兔抗Tubulin一抗標記的HeLa細胞的熒光圖像。然后將細胞分別用HRP標記的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide(左)或AlexaFluor 350酪酰胺(中和右)染色。使用DAPI濾光片組拍攝熒光圖像,并相應地標記曝光時間。在相同的曝光時間(25毫秒)下,iFluor 350 Styramide 顯示出比AlexaFluor 350酪酰胺明顯更高的熒光強度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更長的曝光時間(125毫秒)才能使染色可視化。

 

 

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名稱
 
激發(nm)
 
發射(nm)
 
消光系數(cm -1 M -1
 
量子產率
 
iFluor 488 Styramide * Alexa Fluor 488酪酰胺的優異替代品* 491 516 75000  0.9 
iFluor 555 Styramide * Alexa Fluor 555酪酰胺的優異替代品* 557 570 100000  0.64 
iFluor 568 Styramide * Alexa Fluor 568酪酰胺的優異替代品* 568 587 100000  0.57 


說明書
iFluor 680 Styramide * Alexa Fluor 680酪胺的優異替代品*.pdf


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