Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒 藍色熒光

貨號22795存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格200 Tests價格2544
Ex (nm)341Em (nm)441
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

我們的Cell Meter 檢測試劑盒是一套用于監測細胞生存力的工具。有多種參數可用于檢測細胞活力。該特定試劑盒旨在通過檢測Caspase 3的激活來監測細胞凋亡。由于caspase-3(CPP32 / apopain)的激活對于細胞凋亡的啟動很重要,因此caspase 3被公認為是細胞凋亡的可靠指標。Caspase 3具有對肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)的底物選擇性。該試劑盒使用Ac-DEVD-AMC作為caspase-3活性的熒光指示劑。Caspase 3切割AMC肽會產生強熒光的AMC,該熒光在450-480 nm激發下用340-370 nm的熒光進行監測。該試劑盒可提供所有必需成分,并具有優化的測定方案,該測定適用于高通量測定。該試劑盒以96孔板,每孔使用100 uL試劑,試劑足夠200次檢測。該試劑盒以384孔板,每孔使用25 uL試劑,試劑足夠800次檢測。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的Cell Meter Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒。

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適用儀器


熒光酶標儀  
激發: 540nm
發射: 590nm
cutoff: 570nm
推薦孔板: 黑色透明
讀取模式: 底讀模式


產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

  1. 用測試化合物制備細胞(100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板)
  2. 加入等體積的Caspase 3/7底物工作溶液
  3. 在室溫下孵育1小時
  4. 檢測Ex / Em = 350/450 nm(截止= 420 nm)的熒光強度

 

溶液配制

工作溶液配制

將50 µL Caspase 3/7底物(組分A)添加到10 mL的測定緩沖液(組分B)中,并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。 注意:將未使用的組分A和B分裝并存儲在-20℃下。 避免重復凍結/解凍循環。

 

實驗步驟

  1. 通過向PBS或所需的緩沖液中加入10 µL /孔的10X測試化合物(96孔板)或5 µL /孔的5X測試化合物(384孔板)來處理細胞。對于空白孔(不含細胞的培養基),添加相同量的化合物緩沖液。
  2. 將細胞板在37°C,5%CO2培養箱中孵育(對于喜樹堿處理過的Jurkat細胞,需要4-6小時)以誘導凋亡。
  3. 加入100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的Caspase 3/7底物工作溶液。
  4. 在避光的條件下,在室溫下孵育平板至少1小時。注意:如果需要,在室溫下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分鐘,向選定樣品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制劑,以確認對caspase 3 / 7-like的抑制活動。
  5. 以800 rpm的速度離心細胞板(特別是非粘附細胞)2分鐘(制動)。
  6. 使用熒光酶標儀在Ex / Em = 350/450 nm(截止= 420 nm)處檢測熒光強度。

 

圖示

 

圖1.使用Cell Meter Caspase 3/7活性凋亡測定試劑盒檢測Jurkat細胞中的Caspase 3/7活性。 當天,將Jurkat細胞以80,000個細胞/孔/ 90 µL的濃度接種在Costar黑色96孔板中。 在有和沒有1 µM星形孢菌素的情況下將細胞處理4小時,并在有或沒有10 µM的胱天蛋白酶抑制劑AC-DEVD-CHO的情況下處理細胞10分鐘。 加入半胱天冬酶3/7測定溶液(100μL/孔),并在室溫下孵育1小時。 在Ex / Em = 360 / 470nm(截止= 420nm)下測量熒光強度。

圖2.白蛋白暴露上調了足細胞中的促凋亡途徑。 A,活化的半胱天冬酶3/7活性相對于用5mg / ml白蛋白(實心柱)或5mg / ml右旋糖酐(實心柱)處理的足細胞中的總細胞蛋白標準化了指定的時間。 *表示與相應的右旋糖酐處理的對照相比,P <0.0001。 B,用5mg / ml葡聚糖(Dex)或5mg / ml白蛋白(Alb)處理培養的足細胞的TUNEL染色。核用DAPI染成藍色。 TUNEL陽性細胞核是綠色的。 C,將半胱天冬酶3/7活性標準化為用5 mg / ml白蛋白或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD(泛半胱氨酸蛋白酶抑制劑)處理的足細胞中的總細胞蛋白。 z VAD很大程度上廢除了caspase活性(*,P = 0.01對白蛋白+ z VAD)。 D,用錐蟲藍測定法測定的死細胞百分比,用單獨的5 mg / ml白蛋白(空心柱)或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD(實心柱)處理24小時或5 mg / ml的足細胞單獨使用白蛋白(水平陰影線)或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD 48小時(垂直陰影線)。 *表示在48小時時與白蛋白+ z-VAD相比,P = 0.001。 * Caspase活性是根據制造商的指導使用Caspase 3/7活性試劑盒(AAT Bioquest,Sunnyvale,CA)確定的。資料來源:Graph from Endocytosis of Albumin by Podocytes Elicits an Inflammatory Response and Induces Apoptotic Cell Death by Kayo Okamura, et al., PLoS ONE, Jan. 2013.

 

 

參考文獻

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