Cell Navigator 溶酶體標記試劑盒 深紅色熒光
 | 貨號 | 22659 | 存儲條件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 規格 | 500 Tests | 價格 | 1896 | |
| Ex (nm) | 597 | Em (nm) | 619 | |
| 分子量 | 溶劑 | |||
| 產品詳細介紹 | ||||
簡要概述
Cell Navigator 溶酶體標記試劑盒 深紅色熒光 是一套熒光成像工具，用于標記亞細胞細胞器，如膜，溶酶體，線粒體，細胞核等。該試劑盒使用專有的溶解性染料，可以通過溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中，該指示劑的溶質是一種疏水性化合物，很容易滲透完整的活細胞，并被保留在溶酶體內，進入溶酶體后，其熒光顯著增強，這一關鍵特征顯著降低了其染色背景。適用于多種不同類型的研究中包括細胞粘附、趨化性、多藥耐藥性、細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。該試劑盒提供所有的必需組分和最佳細胞標記方法，適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。LysoBrite染料的性能明顯優于同等的LysoTracker染料（來自Invitrogen）。LysoBrite染料可以在活細胞中停留一周以上，對細胞的毒性極小，而LysoTracker染料只能使用幾個小時，LysoBrite染料可以存活幾代細胞。此外，LysoBrite染料比LysoTracker染料具有更高的光穩定性，百螢生物是為您提供最優質的Cell Navigator 溶酶體標記試劑盒。Cell Navigator 溶酶體標記試劑盒 深紅色熒光 是美國AAT Bioquest研發的產品。
適用儀器
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發: |
Texas Red濾波片 |
| 發射: | Texas Red濾波片 |
| 推薦孔板: | 黑色透明 |
產品說明書
試驗方案
- 準備細胞
- 添加LysoBriteDeep Red染料工作溶液
- 在37°C孵育30分鐘至60分鐘
- 添加染色緩沖液
- 室溫孵育30分鐘
- 在熒光顯微鏡下Ex/Em =590/620nm（Texas Red濾光片組）處進行分析
注意：1）實驗前，取出試劑盒進行室溫凍結。
樣品示例及使用方法
1.準備溶酶體染色溶液：
1.1 取出試劑盒中A、B、C組分，室溫避光靜置5-10min。
1.2 移取10μL LysoBrite Deep Red（組分A），用5mL細胞染色緩沖液（組分B）進行稀釋，制備染料工作液。
注意：1) 10μL的500X LysoBrite Deep Red（組分A）足夠完成一個96孔板，根據要求分裝并儲存未使用的500X LysoBrite Deep Red（組分A），避免反復凍融。
2)熒光溶酶體指示劑的最佳濃度根據實際應用而改變，可以根據探針的滲透性對細胞類型、細胞或組織的染色條件進行調整。
2.細胞染色：
- 對于貼壁細胞：
在96孔黑色墻壁/透明底板（50μL/孔/ 96孔板）或裝有適當培養基內的培養皿的蓋玻片上培養細胞，當細胞達到所需的匯合時，在96孔板或培養皿內加入1/2的LysoBrite Deep Red工作液，在37℃、5％CO2條件下培養箱中孵育30分鐘至60分鐘，將(50 µL /孔/96孔板）的染色緩沖液B（組分C）加入LysoBrite Deep Red工作溶液板中，在室溫下孵育15-30分鐘。再使用配有Texas Red 濾片組的熒光顯微鏡觀察細胞，使之帶深紅色熒光(Ex/Em = 590/620 nm)。
注意：1）LysoBrite Deep Red對細胞的毒性很小或沒有，它可以用于細胞跟蹤。為了進行細胞跟蹤，可跳過添加染色緩沖液B的步驟，只需將染料工作液替換為生長培養基，然后在熒光顯微鏡下觀察即可。如果細胞看起來沒有充分染色，建議適當增加染料濃度或孵育時間。
- 對于懸浮細胞：
在1000rpm條件下離心培養液5分鐘，得到細胞沉淀并棄去上清液，在預熱（37℃）生長培養基例如（100 µL /管）中輕輕重懸細胞沉淀，然后添加1/2體積（50 µL /管）LysoBrite Deep Red工作溶液。在37℃、5％CO2條件下培養箱中孵育30分鐘至60分鐘，將(50 µL /孔/96孔板）的染色緩沖液B（組分C）加入LysoBrite Deep Red工作溶液板中,在室溫下孵育15-30分鐘。再使用配有Texas Red 濾片組的熒光顯微鏡觀察細胞，使之帶深紅色熒光(Ex/Em = 590/620 nm)。
注意: 1）LysoBrite Deep Red對細胞的毒性很小或沒有。它可以用于細胞跟蹤。為了進行細胞跟蹤，可跳過添加染色緩沖液B的步驟，只需將染料工作液替換為生長培養基，然后在熒光顯微鏡下觀察即可。如果細胞看起來沒有充分染色，建議適當增加染料濃度或孵育時間。
2）懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為貼壁細胞染色。
示例數據分析及圖示
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圖一：在Costar黑色透明底96孔板中用Cell Navigator 溶酶體染色試劑盒LysoBrite Deep Red染色Hela細胞的熒光成像結果。 |
 圖二：HeLa細胞分別用A和B，置于Costar黑壁/透明底96孔板中染色后的熒光成像結果，在0秒和120秒的曝光時間下，使用Olympus熒光顯微鏡對信號進行比較。 A: Cell Navigator溶酶體染色試劑盒(Cat# 22659)、B: LysoTracker®Red DND-99(來自Invitrogen公司)。 |
參考文獻
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