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Annexin V, FITC標記

貨號20030存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格100 tests價格2544
Ex (nm)491Em (nm)516
分子量~36000溶劑Water
產品詳細介紹


簡要概述

Annexin V, FITC標記是美國AAT Bioquest生產的膜聯蛋白,膜聯蛋白是在鈣存在下與磷脂膜結合的蛋白質家族。膜聯蛋白V是研究細胞凋亡的有用工具。它被用作探針以檢測在細胞表面上表達磷脂酰絲氨酸的細胞,這是細胞凋亡中發現的特征以及其他形式的細胞死亡。有多種參數可用于監測細胞活力。膜聯蛋白V-染料結合物廣泛用于通過測量磷脂酰絲氨酸(PS)的易位來監測細胞凋亡。在細胞凋亡中,PS被轉移到質膜的外部小葉。磷脂酰絲氨酸在細胞表面上的出現是細胞凋亡的初始/中間階段的通用指示,并且可以在觀察到形態變化之前檢測到。該熒光FITC-膜聯蛋白V綴合物廣泛用于通過流式細胞儀或熒光顯微鏡監測細胞凋亡。對于基于膜聯蛋白V的細胞凋亡檢測的微孔板檢測,我們建議您使用我們的Cell Meter 試劑盒。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商,為您提供最優質的Annexin V, FITC標記探針。

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產品說明書

操作步驟

1.用膜聯蛋白V綴合物制備和孵育細胞:

1.1     制備膜聯蛋白V綴合測定緩沖液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl2,pH 7.4。

1.2     用測試化合物處理細胞一段時間(用星形孢菌素處理的Jurkat細胞4-6小時)以誘導細胞凋亡。

1.3     離心細胞,得到1-5×10 5個細胞/管。

1.4     將細胞重懸于200μLAnnexin V綴合測定緩沖液中(來自步驟1.1)。

1.5     在細胞中加入2μL膜聯蛋白V綴合物。

可選:在細胞內加入死細胞染色劑如碘化丙錠,用于死細胞。

1.6     在室溫下進行30至60分鐘,避光。

1.7     在用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞之前,加入300μLAnnexin V綴合測定緩沖液(來自步驟1.1)以增加體積(參見下面的步驟1.8)。

1.8     使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測熒光強度(參見下面的步驟2或3)。

 

2.使用流式細胞儀分析:

通過使用具有適當濾波器的流式細胞儀來量化膜聯蛋白V綴合物。

注意:對貼壁細胞的膜聯蛋白V結合流式細胞術分析未經過常規測試,因為在細胞分離過程中可能會發生特定膜損傷。

 

3.使用熒光顯微鏡分析:

3.1    吸取步驟1.6中的細胞懸液,用膜聯蛋白V結合測定緩沖液(步驟1.1)沖洗1-2次,然后用膜聯蛋白V結合測定緩沖液(步驟1.1)重懸細胞。 將細胞添加到載玻片上并蓋上蓋玻片。

注意:對于貼壁細胞,建議直接在蓋玻片上培養細胞。 與膜聯蛋白V結合物孵育后(步驟1.6),用膜聯蛋白V結合測定緩沖液(來自步驟1.1)沖洗1-2次,然后將膜聯蛋白V結合測定緩沖液(來自步驟1.1)加回到蓋玻片上。 將蓋玻片倒在載玻片上并使細胞可視化。 與膜聯蛋白V綴合物一起孵育后,也可以將細胞固定在2%甲醛中,并在顯微鏡下觀察。

3.2     在熒光顯微鏡下用適當的濾光片分析膜聯蛋白V綴合物的凋亡細胞。

 

參考文獻

Response of Mammalian cells to non-thermal intense narrowband pulsed electric fields
Authors: Sunao Katsuki, Yulan Li, Daiki Miyakawa, Ryo Yamada, Nobuaki Onishi, Soowon Lim
Journal: (2017): 1358--1361

 

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產品名稱 貨號
Annexin V, TRITC標記 Cat#20031


說明書
Annexin V, FITC標記.pdf


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