吲哚菁綠ICG-ATT

貨號181存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格1 mg價格5136
Ex (nm)789Em (nm)814
分子量760.49溶劑DMSO
產品詳細介紹


簡要概述

吲哚菁綠(ICG)是一種用于醫學診斷的花青染料。它用于確定心輸出量,肝功能和肝血流量,以及用于眼科血管造影。它具有接近800nm的峰值光譜吸收。這些紅外線能穿透視網膜層,使ICG血管造影成像比熒光血管造影更深的循環模式。ICG的半衰期為150至180秒,僅通過肝臟從膽汁液中排出。最近的一項研究表明ICG在注射后20分鐘內靶向動脈粥樣硬化,并提供足夠的信號增強,用于動脈粥樣硬化兔子體內的脂質,發炎,冠狀動脈大小的斑塊的檢測。離體熒光反射成像顯示,與注射生理鹽水的動脈粥樣硬化兔相比,注射ICG的動脈粥樣硬化兔的斑塊靶 - 背景比高。氨基反應性ICG衍生物用于與抗體和其他生物分子制備ICG生物綴合物。所有ICG染料都需要溶解在DMSO中。

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產品說明書

樣本標記分析

注意:該標記方案是針對山羊抗小鼠IgG與ICG的綴合物開發的。

 

1.準備蛋白質儲備溶液(溶液A):

將100L反應緩沖液(例如,1M碳酸鈉溶液或1M磷酸鹽緩沖液,pH~9.0)與900L目標蛋白質溶液(例如抗體,蛋白質濃度> 2mg / ml,)混合,得到1 mL蛋白標記儲備液。

注意1:蛋白質溶液(溶液A)的pH值應為8.5±0.5。 如果蛋白質溶液的pH低于8.0,則需使用1M碳酸氫鈉溶液或1M pH 9.0磷酸鹽緩沖液將pH調節至8.0-9.0的范圍。

注意2:蛋白質應溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中。如果蛋白質溶解在Tris或甘氨酸緩沖液中,則必須用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去用于蛋白質沉淀的游離胺或銨鹽(例如硫酸銨和乙酸銨)。

注意3:牛血清白蛋白(BSA)、明膠穩定不純的抗體等標記的效果不理想。 疊氮化鈉或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應。 可以通過透析或旋轉柱除去疊氮化鈉或硫柳汞,以獲得最佳標記結果。

注意4:如果蛋白質濃度低于2 mg / mL,則結合效率明顯降低。 為獲得最佳標記效率,建議最終蛋白質濃度范圍為2-10 mg / mL。

 

2.準備染料儲備溶液(溶液B):

將無水DMSO加入到ICG染料小瓶中以制備10-20mM儲備溶液。 通過移液或渦旋混合均勻。

注意:在開始綴合之前準備染料儲備溶液(溶液B),現配現用,保持溶液新鮮。 染料儲備溶液的長期儲存可降低染料活性。 溶液B可以在不受光照和潮濕的情況下儲存在冰箱中兩周。 避免凍融循環。

 

3.確定最佳染料/蛋白質比例(可選):

注意:每種蛋白質都需要不同的染料/蛋白質比例,這也取決于染料的性質。蛋白質的過度標記可能對其結合親和力產生不利影響,而低染料/蛋白質比率的蛋白質綴合物會降低靈敏度。我們建議您通過使用連續不同量的標記染料溶液重復步驟4和5來實驗確定最佳染料/蛋白質比率。通常,對于大多數染料 - 蛋白質綴合物,推薦使用4-6種染料/蛋白質。

3.1使用10:1摩爾比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白質)作為起點:將5μl染料儲備溶液(溶液B,假設染料儲備溶液為10 mM)加入到樣品瓶中,蛋白質溶液(95μl溶液A)。假設蛋白質濃度為10mg / mL并且蛋白質的分子量為~200KD,蛋白質的濃度為~0.05mM。

注意:蛋白質溶液中DMSO的濃度應<10%。

3.2運行結合反應(見下面的步驟4)。

3.3重復#3.2,溶液B /溶液A的摩爾比為5:1;分別為15:1和20:1。

3.4使用預制的旋轉柱純化所需的綴合物。

3.5計算上述4種結合物的染料/蛋白質比例(DOS)。

3.6運行上述4種綴合物的功能檢測,確定最佳的染料/蛋白質比例,以擴大標記反應。

 

4.運行綴合反應:

4.1在有效搖動下,將適量的染料儲備溶液(溶液B)加入到蛋白質溶液(溶液A)的小瓶中。

注意:溶液B /溶液的最佳摩爾比由步驟3.6確定。 如果跳過步驟3,我們建議使用10:1摩爾比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白質)。

4.2繼續在室溫下旋轉或搖動反應混合物30-60分鐘。

 

5.純化綴合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱純化染料 - 蛋白質綴合物的實例。

5.1按照制造說明準備Sephadex G-25色譜柱。

5.2將反應混合物(直接來自步驟4)加載到Sephadex G-25柱的頂部。

5.3樣品在頂部樹脂表面下方運行時,加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4將更多PBS(pH 7.2-7.4)加入所需樣品中以完成柱純化。 

注意1:對于立即使用時,染料 - 蛋白質偶聯物需要用染色緩沖液稀釋,并等分多次使用。

注意2:對于長期儲存,染料 - 蛋白質綴合物溶液需要濃縮或冷凍干燥。

 

參考文獻

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