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mFluor Violet 450 馬來酰亞胺

貨號1600存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格1 mg價格2544
Ex (nm)406Em (nm)445
分子量664.63溶劑DMSO
產品詳細介紹


簡要概述

mFluor Violet 450 馬來酰亞胺是美國AAT Bioquest生產的熒光標記染料,AAT Bioquest的mFluor 染料專為多色流式細胞儀應用而開發。這些染料具有大的斯托克斯位移,并且可以通過流式細胞儀的激光線(例如,405nm,488nm和633nm)很好地激發。mFluor Violet 450染料的熒光激發和發射最大值分別為~405 nm和~450 nm。這些光譜特性使其成為Pacific Blue 標記染料的絕佳替代品。mFluor Violet 450馬來酰亞胺是穩定的,并且與巰基顯示出良好的反應性和選擇性。mFluor Violet 450馬來酰亞胺提供了一種方便的工具,可用于標記單克隆,多克隆抗體或其他蛋白質(> 10 kDa),用于紫外激光激發的流式細胞儀應用。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的mFluor Violet 450 馬來酰亞胺。 

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產品說明書

操作方法

注意:該標記方案是針對山羊抗小鼠IgG與mFluor 450 SE的綴合物開發的。 您需根據您的實際情況而定。

1.準備蛋白質儲備溶液(溶液A):

將100μL反應緩沖液(如1 M碳酸鈉溶液或1 M磷酸鹽緩沖液,pH~9.0)與900μL目標蛋白溶液(如抗體,蛋白質濃度> 2 mg / ml,如果可能)混合至100μL給1 mL蛋白質標記原液。

注1:蛋白質溶液(溶液A)的pH值應為8.5±0.5。如果蛋白質溶液的pH低于8.0,則使用1M碳酸氫鈉溶液或1M pH 9.0磷酸鹽緩沖液將pH調節至8.0-9.0的范圍。

注2:蛋白質應溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中。如果蛋白質溶解在Tris或甘氨酸緩沖液中,則必須用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去廣泛用于蛋白質沉淀的游離胺或銨鹽(例如硫酸銨和乙酸銨)。

注3:用牛血清白蛋白(BSA)或明膠穩定的不純抗體或抗體不能很好地標記。疊氮化鈉或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應??梢酝ㄟ^透析或旋轉柱除去疊氮化鈉或硫柳汞,以獲得最佳標記結果。

注4:如果蛋白質濃度低于2 mg / mL,則結合效率顯著降低。為獲得最佳標記效率,建議最終蛋白質濃度范圍為2-10 mg / mL。

 

2.準備染料儲備溶液(溶液B):

將無水DMSO加入到mFluor 染料SE小瓶中以制備10-20mM儲備溶液。 通過移液或渦旋混合均勻。

注意:在開始綴合之前準備染料儲備溶液(溶液B)及時使用。 染料儲備溶液的長期儲存可降低染料活性。 溶液B可以在不受光照和潮濕的情況下儲存在冰箱中兩周。 避免凍融循環。

 

3.確定最佳染料/蛋白質比例(可選):

注意:每種蛋白質都需要不同的染料/蛋白質比例,這也取決于染料的性質。蛋白質的過度標記可能對其結合親和力產生不利影響,而低染料/蛋白質比率的蛋白質結合物會降低靈敏度。 我們建議您通過使用連續不同量的標記染料溶液重復步驟4和5來實驗確定最佳染料/蛋白質比率。通常,對于大多數染料 - 蛋白質綴合物,推薦使用4-6種染料/蛋白質。

3.1使用10:1摩爾比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白質)作為起始點:將5μl染料儲備溶液(溶液B,假設染料儲備溶液為10 mM)加入到樣品瓶中。蛋白質溶液(95μl溶液A)有效搖動。假設蛋白質濃度為10mg / mL并且蛋白質的分子量為~200KD,蛋白質的濃度為~0.05mM。

注意:蛋白質溶液中DMSO的濃度應<10%。

3.2進行綴合反應(參見下面的步驟4)。

3.3重復#3.2,溶液B /溶液A的摩爾比為5:1; 分別為15:1和20:1。

3.4使用預制的旋轉柱純化所需的綴合物。

3.5計算上述4種結合物的染料/蛋白質比(DOS)。

3.6運行上述4種結合物的功能測試,以確定最佳的染料/蛋白質比例,以擴大您的標記反應。

 

4.運行結合反應:

4.1在有效搖動下,將適量的染料儲備溶液(溶液B)加入到蛋白質溶液(溶液A)的小瓶中。

注意:溶液B /溶液的最佳摩爾比由步驟3.6確定。 如果跳過步驟3,我們建議使用10:1摩爾比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白質)。

4.2繼續在室溫下旋轉或搖動反應混合物30-60分鐘。

 

5.純化綴合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱純化染料 - 蛋白質綴合物的實例。

5.1按照制造說明準備Sephadex G-25色譜柱。

5.2將反應混合物(直接從步驟4)加載到Sephadex G-25柱的頂部。

5.3樣品在樹脂頂部表面下方運行后立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4向所需樣品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色譜柱純化。 合并含有所需染料 - 蛋白質綴合物的級分。

注1:立即使用時,染料 - 蛋白質偶聯物需要用染色緩沖液稀釋,并等分多次使用。

注2:對于長期儲存,染料 - 蛋白質結合物溶液需要濃縮或冷凍干燥

 

參考文獻

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153--0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011--E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425--E436

 

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產品名稱 貨號
mFluor Violet 450 酸 Cat#1140


說明書
mFluor Violet 450 馬來酰亞胺.pdf


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