Amplite NADH檢測試劑盒(熒光法) 紅色熒光

貨號15261存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格400 Tests價格3840
Ex (nm)571Em (nm)585
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Amplite NADH檢測試劑盒(熒光法)是美國AAT Bioquest 研發的檢測NADH的試劑盒,煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD +)和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP +)是細胞中發現的兩種重要的輔因子。 NADH是NAD +的還原形式,NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP,通過酯鍵將磷酸基團添加到腺苷核苷酸的2'位置。

傳統的NAD / NADH和NADP / NADPH測定通過監測340nm處NADH或NADPH吸收的變化來完成。 傳統NAD / NADH和NADP / NADPH測定的短UV波長使得這些方法具有低靈敏度和高干擾。 由于NAD和NADH的吸收較弱,紫外吸收方法需要較大的樣品量,如果樣品的可用性有限,則使相同的NAD和NADH測量不實用。

這種Amplite 熒光NADH檢測試劑盒為檢測NADH提供了一種便捷的方法。 系統中的酶在酶循環反應中特異性識別NADH。 此外,該測定具有非常低的背景,因為其在紅色可見范圍內運行,這顯著降低了生物樣品的干擾。 Amplite 熒光NADH分析試劑盒提供靈敏的一步法分析,可在100μL分析體積(1μM)內檢測少至100皮摩爾的NADH。 可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行測定。 其信號可通過Ex / Em = 540/590 nm的熒光酶標儀或~576 nm的吸光度酶標儀輕松讀取。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的Amplite NADH檢測試劑盒。 

 

適用儀器


熒光酶標儀  
激發: 540nm
發射: 590nm
cutoff: 570nm
推薦孔板: 黑色孔板


產品說明書

96孔板測定示例

概述

準備NADH反應混合物(50μL)

加入NADH標準品或測試樣品(50μL)

在室溫下孵育15分鐘 -  2小時

監測Ex / Em = 540/590 nm處的熒光強度

 

1.準備NADH儲備溶液:
將200μLPBS緩沖液加入到NADH標準品(組分C)的小瓶中以制備1mM(1nmol / L)NADH儲備溶液。
注意:未使用的NADH儲備溶液應分成單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

2.準備NADH反應混合物:
將10mL Amplite NADH測定緩沖液(組分B)加入NADH再循環酶混合物(組分A)的瓶中,并充分混合。
注意:這種NADH反應混合物足以用于兩個96孔或四個384孔板。未使用的NADH反應混合物應分成單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

3.準備NADH標準品的系列稀釋液(0至100μM):
3.1將50μL的NADH儲備溶液(來自步驟1)加入到450μLPBS緩沖液(pH 7.4)中以產生100μM(100pmol / L)NADH標準溶液。
注意:稀釋的NADH標準溶液不穩定,應在4小時內使用。

3.2取200μL的100μMNADH標準溶液進行1:3連續稀釋,得到30,1,10,3,1,0.3,0.1和0μM的NADH標準品系列稀釋液。

3.3如表1和表2所述,將NADH標準品和含有NADH的測試樣品的系列稀釋液加入到固體黑色96孔微量培養板中
注意:根據需要準備細胞或組織樣本。

 

表1實心黑色96孔微孔板中NADH標準品和測試樣品的布局

BL

BL

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2

 

 

NS3

NS3

 

 

NS4

NS4

 

 

NS5

NS5

 

 

NS6

NS6

 

 

NS7

NS7

 

 

注意:NS = NADH標準,BL =空白對照,TS =測試樣品

 

表2每個孔的試劑組成

NADH Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

PBS: 50 μL

50 μL 

*注意:將連續稀釋的NADH標準品(0.1μM至100μM)加入NS1至NS7的孔中,一式兩份

 

4.在上清液反應中運行NADH測定:
4.1將50μL的NADH反應混合物(來自步驟2)加入NADH標準品,空白對照和測試樣品的每個孔中(參見步驟3.3),使總NADH測定體積為100μL/孔
注意:對于384孔板,每孔加入25μL樣品和25μLNADH反應混合物。

4.2在室溫下孵育反應15分鐘至2小時,避光。
4.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的熒光板讀數器監測熒光增加(在Ex / Em = 540 / 590nm處最佳)。
注1:也可將板的內容物轉移到白色透明底板上,用吸光度酶標儀在576±5nm波長下讀數。 與熒光讀數相比,吸收檢測具有較低的靈敏度。
注2:對于基于細胞的NADH測量,建議使用ReadiUse 哺乳動物細胞裂解緩沖液* 5X *(cat#20012)裂解細胞。

 

數據分析

        空白孔中的熒光(僅用PBS緩沖液)用作對照,并從具有NADH反應的那些孔的值中減去。 NADH標準曲線如圖1所示。
        注意:熒光背景隨時間增加,因此減去每個數據點的空白孔的熒光強度值是很重要的。

圖1.使用NOVOStar酶標儀(BMG Labtech)在96孔黑色板中用Amplite NADH測定試劑盒測量NADH劑量反應。 在孵育1小時(n = 3)時,可以檢測到低至1μM(100pmol /孔)的NADH,而NAD沒有響應。

 

參考文獻

Mycoplasma pneumoniae protects infected epithelial cells from hydrogen peroxide-induced cell detachment.
Authors: Takeshi Yamamoto, Yutaka Kida, Koichi Kuwano
Journal: Cellular microbiology (2019): e13015

Design, synthesis, and ex vivo evaluation of a selective inhibitor for retinaldehyde dehydrogenase enzymes
Authors: Angelica R Harper, Anh T Le, Timothy Mather, Anthony Burgett, William Berry, Jody A Summers
Journal: Bioorganic & medicinal chemistry (2018)

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124--133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621--7636

 

相關產品

產品名稱 貨號
Amplite NAD檢測試劑盒 (熒光法)藍色熒光 Cat#15280
Amplite NADP檢測試劑盒(熒光法)藍色熒光 Cat#15281
Amplite 熒光法乙酰膽堿檢測試劑盒 紅色熒光 Cat#11403


說明書
Amplite NADH檢測試劑盒(熒光法) 紅色熒光.pdf


欧美精品黑人粗大