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胱天蛋白酶Caspase 9熒光底物Ac-LEHD-AMC 藍

貨號13426存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格5 mg價格1896
Ex (nm)341Em (nm)441
分子量711.72溶劑DMSO
產品詳細介紹


簡要概述

胱天蛋白酶Caspase 9熒光底物Ac-LEHD-AMC 藍是美國AAT Bioquest生產的熒光底物,Caspase 9是半胱氨酸蛋白酶家族中CED-3亞家族成員,在凋亡起始階段占有必要地位。這些酶主要具有特異的保守性區域,并特異的切開識別位點后面的天冬氨酸殘基。起始凋亡蛋白酶(例如caspases-8)激活效應蛋白酶,例如caspase-3或者-7。這些效應蛋白酶然后酶切細胞底物導致凋亡的形態學改變。AC-LHED-AMC是caspase-9選擇性熒光底物。Caspase-9酶切水解特異性底物AC-LHED-AMC,導致釋放AMC熒光集團,其激發波長是365nm,發射光波長為450nm。這個實驗的準備試驗緩沖液包含50nM MES,pH6.5,10%PEG8000, 0.1% CHAPS, 5 mM DTT, and 1 mM EDTA.。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的胱天蛋白酶Caspase 9熒光底物Ac-LEHD-AMC 藍。

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產品說明書

樣品實驗方案

以下說明書僅提供指南,實際應根據您的具體需求進行修改。

1.使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的一般溶液Caspase測定

1.1在DMSO中制備10mM儲備溶液。

1.2制備2X半胱天冬酶底物(50μM)測定溶液,如下所示:

50 L基質原液

100L DTT(1M)

400L EDTA(100 mM)

10mL Tris緩沖液(20mM),pH = 7.4

1.3將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液(來自步驟1.2)混合,并在室溫下孵育溶液至少1小時。

1.4使用熒光酶標儀檢測熒光,或使用吸光度酶標儀檢測吸光度。

 

2.細胞Caspase檢測使用細胞滲透FMK半胱天冬酶探針

2.1在DMSO中制備2-5mM儲備溶液。

2.2根據需要對細胞進行處理。

2.3通過用20mM Hepes緩沖液(HHBS)稀釋Hanks中的DMSO儲備溶液(來自步驟2.1),制備2X可滲透的半胱天冬酶底物(20μM)測定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物測定溶液(來自步驟2.3)混合等體積的處理細胞,并將細胞在37℃,5%CO 2培養箱中孵育至少1小時。

2.5用HHBS洗滌細胞至少一次。

2.6用流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。

 

3.細胞Caspase檢測使用細胞滲透性FMK Caspase探針(僅適用于#13470-13476)

3.1通過向小瓶中加入50μLDMSO制備250X儲備溶液。

3.2根據需要對細胞進行處理。

3.3將250 X DMSO儲備溶液(來自步驟3.1)以1:250的比例(例如2 uL至500 uL細胞)添加到細胞溶液中,并將細胞在37°C,5%CO 2培養箱中孵育1 小時。

3.4用HHBS洗滌細胞至少一次。

3.5用流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。

 

參考文獻

Structure-dependent induction of apoptosis by hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids in the human hepatoma cell line HepaRG: Single versus repeated exposure
Authors: Julia Waizenegger, Albert Braeuning, Markus Templin, Alfonso Lampen, Stefanie Hessel-Pras
Journal: Food and Chemical Toxicology (2018)

pH-Assisted surface functionalization of selenium nanoparticles with curcumin to achieve enhanced cancer chemopreventive activity
Authors: Shaoxuan Yu, Yanru Wang, Wentao Zhang, Yuhuan Zhang, Wenxin Zhu, Yingnan Liu, Daohong Zhang, Jianlong Wang
Journal: RSC Advances (2016): 72213--72223



說明書
胱天蛋白酶Caspase 9熒光底物Ac-LEHD-AMC 藍.pdf


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