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熒光堿性磷酸酶底物 DiFMUP

貨號11627存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格5 mg價格1236
Ex (nm)Em (nm)
分子量292.13溶劑DMSO
產品詳細介紹


簡要概述

6,8-二氟-4-甲基傘形基磷酸酯(DiFMUP)是美國AAT Bioquest生產的熒光素,該產品在與磷酸酶相互作用后,無色和非熒光FDP被水解成高熒光熒光素,其表現出優異的光譜特性,與配備有氬激光激發的大多數熒光儀器的最佳檢測相匹配?;蛘?,FDP也可用于檢測發色模式中的磷酸酶,因為酶產物(熒光素)表現出很大的消光系數(接近100,000cm-1mol-1)。在一些文獻中,FDP被認為是最敏感的熒光磷酸酶底物之一。FDP已廣泛用于各種ELISA測定。此外,它還用于檢測酪氨酸磷酸酶。FDP是熱不穩定的,需要特別注意保存固體樣品和儲備溶液。

Mup是用于磷酸酶的熒光底物。它廣泛用于檢測溶液中的磷酸酶。然而,這種磷酸酶底物不適合活細胞或連續測定,因為MU(4-甲基傘形酮)是酶產物,其僅在pH值> 10時發展出最大熒光。因此,也難以使用MUP檢測具有酸性最佳pH范圍的磷酸酶,例如酸性磷酸酶。

AAT Bioquest提供的CF-MUP Plus,用于解決與MUP基質相關的pH限制問題。CF-MU在pH 5.0以上表現出最大熒光,因此CF-MUP底物可以很好地用于連續磷酸酶測定。它還可以用于酸性pH的測定,例如酸性磷酸酶和一些蛋白磷酸酶。

衍生自紅色熒光二甲基吖啶酮(Sun Red)的磷酸酶底物僅含有單個水解敏感部分,從而避免了基于熒光素底物的雙相動力學。磷酸酶催化的太陽紅磷酸鹽(SRP)的水解產生可以用633nm激光激發并且發射~660nm的太陽紅熒光團。雖然Sun Red很容易在633 nm處激發,紅色發射約為660 nm,但SRP在633 nm處的吸收非常小,沒有紅色發射,使SRP成為最敏感的NIR磷酸酶傳感器之一。請不要使用DMSO制備儲備溶液,因為它會顯著增加分析背景。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的6,8-二氟-4-甲基傘形基磷酸酯(DiFMUP)。



產品說明書

磷酸鹽底物的測定方案

概述

在Tris緩沖液(50μL)中制備10-50μM磷酸鹽

添加磷酸酶標準品和/或測試樣品(50μL)

在室溫或37℃孵育30至120分鐘監測熒光強度

注意:以下是溶液中磷酸酶測定的推薦方案。 該說明僅提供指導,應根據具體需要進行修改。

 

1.準備工作解決方案:

1.1在升值溶劑中制備2至10 mM的儲備溶液(見說明書中的表)。任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃冷凍。

注意1:不要使用DMSO,ETOH或METH制備SunRed™磷酸鹽(目錄號11629)的原液,因為它可以顯著提高分析背景。

注意2:避免反復凍融循環,避免光照。

1.2制備2X磷酸鹽工作溶液:在實驗當天,將底物溶解在升值溶劑中或在室溫下解凍等份的儲備溶液(來自步驟1.1)。在100 mM Tris緩沖液或您選擇的緩沖液(pH 8至9)(非磷酸鹽緩沖液)中制備10至50μM的2X工作溶液。

 

2.在上清液中進行磷酸酶測定:

2.1將50μL2X磷酸鹽工作溶液(來自步驟1.2)加入磷酸酶標準品,空白對照和測試樣品的每個孔中,使總磷酸酶測定體積為100μL/孔。

注意:對于384孔板,每孔加入25μL樣品和25μL2X磷酸鹽工作溶液。

2.2在所需溫度下孵育反應30至120分鐘,避光。

2.3用熒光板讀數器檢測適當濾光片組(見說明書中的表)的熒光增加。

2.4空白孔中的熒光(僅用測定緩沖液)用作對照,并從具有磷酸酶反應的那些孔的值中減去。

 

參考文獻

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說明書
熒光堿性磷酸酶底物 DiFMUP.pdf


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