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mFluor Green 620 酸

貨號1144存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格5 mg價格3840
Ex (nm)525Em (nm)623
分子量584.53溶劑DMSO
產品詳細介紹


簡要概述

mFluor Green 620 酸是美國AAT Bioquest生產的mFluor系列熒光染料。mFluor Green 620染料是一種獨特的染料,可被532 nm的綠色激光充分激發,產生紅色熒光。 mFluor Green 620染料是水溶性的,用mFluor Green 620染料制備的蛋白質偶聯物,斯托克斯位移約為80 nm。 mFluor Green 620染料和偶聯物是出色的綠色激光試劑,適用于流式細胞術研究和熒光成像應用。

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產品說明書

操作方法

注意:該標記方案是針對山羊抗小鼠IgG與mFluor 450 SE的綴合物開發的。 您需根據您的實際情況而定。

1.準備蛋白質儲備溶液(溶液A):

將100μL反應緩沖液(如1 M碳酸鈉溶液或1 M磷酸鹽緩沖液,pH~9.0)與900μL目標蛋白溶液(如抗體,蛋白質濃度> 2 mg / ml)混合至100μL,以得到1 mL蛋白質標記原液。

注1:蛋白質溶液(溶液A)的pH值應為8.5±0.5。如果蛋白質溶液的pH低于8.0,則使用1M碳酸氫鈉溶液或1M pH 9.0磷酸鹽緩沖液將pH調節至8.0-9.0的范圍。

注2:蛋白質應溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中。如果蛋白質溶解在Tris或甘氨酸緩沖液中,則必須用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去用于蛋白質沉淀的游離胺或銨鹽(例如硫酸銨和乙酸銨)。

注3:不純的抗體、穩定的牛血清蛋白(BSA)抗體或明膠不會被很好的標記,疊氮化鈉或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應??梢酝ㄟ^透析或旋轉柱除去疊氮化鈉或硫柳汞,以獲得極佳標記結果。

注4:如果蛋白質濃度低于2 mg / mL,則結合效率會顯著降低。為獲得極佳標記效率,建議最終蛋白質濃度范圍為2-10 mg / mL。

 

2.準備染料儲備溶液(溶液B):

將無水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制備10-20mM儲備溶液。 通過移液或渦旋混合均勻。

注意:在開始綴合前準備染料儲備溶液(溶液B),及時使用。 染料儲備溶液的長期儲存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存兩周,避光保存。 避免凍融循環。

 

3.確定最佳染料/蛋白質比例(可選):

注意:每種蛋白質都需要不同的染料/蛋白質比例,這也取決于染料的性質。蛋白質的過度標記可能影響其結合親和力,而低染料/蛋白質比率的蛋白質綴合物會降低靈敏度。我們建議您通過使用連續不同量的標記染料溶液重復步驟4和5來實驗確定最佳染料/蛋白質比率。通常,對于大多數染料 - 蛋白質綴合物,推薦使用4-6種染料/蛋白質。

3.1使用10:1摩爾比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白質)作為起始點:將5μl染料儲備溶液(溶液B,假設染料儲備溶液為10 mM)加入到樣品瓶中。蛋白質溶液(95μl溶液A)有效搖動。假設蛋白質濃度為10mg / mL并且蛋白質的分子量為~200KD,蛋白質的濃度為~0.05mM。

注意:蛋白質溶液中DMSO的濃度應<10%。

3.2運行綴合反應(參見下面的步驟4)。

3.3重復#3.2,溶液B /溶液A的摩爾比為5:1;分別為15:1和20:1。

3.4使用預制的旋轉柱純化所需的綴合物。

3.5計算上述4種結合物的染料/蛋白質比(DOS)。

3.6檢測上述4種結合物,確定最佳的染料/蛋白質比例,以擴大標記反應。

 

4.運行結合反應:

4.1有效加入適量的染料儲備溶液(溶液B)到蛋白質溶液(溶液A)的小瓶中晃動。

注意:溶液B /溶液的最佳摩爾比由步驟3.6確定。如果跳過步驟3,我們建議使用10:1溶液B(染料)/溶液A(蛋白質)的摩爾比。

4.2繼續在室溫下旋轉或搖動反應混合物30-60分鐘。

 

5.純化綴合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱純化染料 - 蛋白質綴合物的實例。

5.1按照說明書準備Sephadex G-25色譜柱。

5.2將反應混合物(直接從步驟4)加載到Sephadex G-25柱的頂部。

5.3樣品在頂部樹脂表面下方運行時立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4向所需樣品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色譜柱純化。

注1:立即使用時,染料 - 蛋白質偶聯物需要用染色緩沖液稀釋,并等分多次使用。

注2:對于長期儲存,染料 - 蛋白質綴合物溶液需要濃縮或冷凍干燥。

 

參考文獻

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153--0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011--E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425--E436

 

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產品名稱 貨號
mFluor Violet 450 馬來酰亞胺 Cat#1600
mFluor Violet 540 酸 Cat#1142
熒光標記染料 mFluor Violet 510 酸 Cat#1141


說明書
mFluor Green 620 酸.pdf


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