Amplite 熒光法乙酰膽堿檢測試劑盒 紅色熒光

貨號11403存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格200 Tests價格2544
Ex (nm)571Em (nm)584
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Amplite 熒光法乙酰膽堿檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于檢測乙酰膽堿酯酶的試劑盒,膽堿是一種強有機堿,是卵磷脂的組成成分,也存在于神經鞘磷脂之中,是機體可變甲基的一個來源而作用于合成甲基的產物,同時又是乙酰膽堿的前體。乙酰膽堿(AcetylCholine,ACh)是一種神經遞質,能特異性的作用于各類膽堿受體,在組織內迅速被膽堿酯酶破壞,其作用廣泛,選擇性不高。在神經細胞中,乙酰膽堿是由膽堿和乙酰輔酶A在膽堿乙酰移位酶(膽堿乙?;福┑拇呋饔孟潞铣傻?。膽堿和乙酰膽堿在許多生物學過程中發揮重要的作用。Amplite乙酰膽堿檢測試劑盒 *紅色熒光* 為定量檢測膽堿提供了一種最靈敏的方法。本試劑盒使用Amplite Red對氧化酶介導的酶偶聯反應產物膽堿進行定量檢測。Amplite Red的紅色熒光強度與膽堿的量成比例關系。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的Amplite 熒光法乙酰膽堿檢測試劑盒。

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適用儀器


熒光酶標儀  
激發: 540nm
發射: 590nm
cutoff: 570nm
推薦孔板: 黑色孔板


產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備ACh工作溶液(50μL)
2.添加ACh標準品或ACh測試樣品(50μL)
3.在室溫下孵育10-30分鐘
4.監測Ex / Em = 540/590 nm處的熒光強度(截止= 570 nm)

 

溶液制備 

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣,并在制備后儲存在-20°C。 避免反復凍融循環。
1. Amplite 紅色儲備液(250X):
將40μLDMSO(組分E)加入到Amplite Red(組分A)的小瓶中以制備250X Amplite Red原液。

2.乙酰膽堿標準溶液(50 mM):
將200μLddH2O加入到乙酰膽堿標準品(組分C)的小瓶中以制備50mM乙酰膽堿標準溶液。

 

2.標準溶液

乙酰膽堿標準
將20μL50mM乙酰膽堿標準溶液加入到980μL測定緩沖液(組分D)中以產生1000μM乙酰膽堿標準溶液。 取1000μM乙酰膽堿標準品,在分析緩沖液(組分D)中進行1:10,得到100μM乙酰膽堿標準品(AS7)。 取100μM乙酰膽堿標準品(AS7)和1:3連續稀釋液,用分析緩沖液(組分D)連續稀釋乙酰膽堿標準品(AS6-AS1)。 注意:稀釋的乙酰膽堿標準溶液不穩定,應在4小時內使用。

 

3.工作溶液

1.將5mL測定緩沖液(組分D)加入乙酰膽堿探針(組分B)瓶中并充分混合。

2.將20μL250XAmplite Red 儲備溶液加入乙酰膽堿探針溶液瓶中,制成乙酰膽堿(ACh)工作溶液。 注意:應立即使用乙酰膽堿(ACh)工作溶液并避光。 測定背景將隨著更長的儲存時間而增加。

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樣品分析

表1.實心黑色96孔微孔板中乙酰膽堿標準品和測試樣品的布局。 AS =乙酰膽堿標準品(AS1-AS7,0.14至100μM); BL =空白對照; TS =測試樣品。

BL BL TS TS
AS1 AS1 ... ...
AS2 AS2 ... ...
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每個孔的試劑組成

容積 試劑
AS1-AS7 50ul 連續稀釋液(0.14至100μM)
BL 50ul 分析緩沖液
TS 50ul 測試樣本

1.根據表1和2中提供的布局制備乙酰膽堿標準品(AS),空白對照(BL)和測試樣品(TS)。對于384孔板,每孔使用25μL試劑代替50μL。 注意:根據需要處理細胞或組織樣本。

2.向乙酰膽堿標準品,空白對照和測試樣品的每個孔中加入50μL乙酰膽堿(ACh)工作溶液,使總乙酰膽堿測定體積為100μL/孔。 對于384孔板,在每個孔中加入25μL乙酰膽堿(ACh)工作溶液,總體積為50μL/孔。

3.在室溫下孵育反應10至30分鐘,避光。

4.用Ex / Em = 540 / 590nm(截止值= 570nm)的熒光酶標儀監測熒光增加。

 

參考文獻

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說明書
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