Amplite 熒光法過氧化氫酶檢測試劑盒 紅色熒光

貨號11306存儲條件 Multiple
規格200 Tests價格2544
Ex (nm)571Em (nm)584
分子量溶劑
產品詳細介紹


簡要概述

Amplite 熒光法過氧化氫酶檢測試劑盒 紅色熒光是美國AAT Bioquest生產的用于檢測過氧化氫酶的試劑盒過氧化氫酶是一種常見的抗氧化血紅素氧化還原酶,幾乎在暴露于氧氣的所有生物體中存在。酶在過氧化物酶體亞細胞器中濃縮。 過氧化氫是一種ROS,是正常有氧代謝和致病性ROS產生的毒性產物,涉及氧化酶和超氧化物歧化酶反應。 通過防止過量的H2O2積累,過氧化氫酶允許重要的細胞過程產生作為副產物的H2O2安全地發生。

Amplite 熒光過氧化氫酶分析試劑盒為過氧化氫酶活性的測量提供了一種快速而靈敏的方法。它可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行,并且無需分離步驟即可輕松適應自動化。過氧化氫酶與H2O2反應生成水和氧(O2)。Amplite Red還與H2O2反應生成紅色熒光產物。因此,熒光強度的降低與過氧化氫酶活性成比例。用于測定的Amplite Red底物實現雙重可記錄模式。熒光信號可以通過Ex / Em = 540 / 590nm的熒光酶標儀或~576nm的吸光度酶標儀容易地讀取。使用Amplite 熒光過氧化氫酶分析試劑盒,我們在100μL反應體積中檢測到低至30 mU / mL的過氧化氫酶。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的Amplite 熒光法過氧化氫酶檢測試劑盒。 

 

適用儀器


熒光酶標儀  
激發: 540nm
發射: 590nm
cutoff: 570nm
推薦孔板: 黑色孔板


產品說明書

96孔板測定示例

概述

準備過氧化氫酶標準品和/或測試樣品(50μL)

加入H2O2分析緩沖液(50μL)

在室溫下孵育10-30分鐘加入過氧化氫酶分析混合物(50μL)

在室溫下孵育10-30分鐘監測熒光增加 Ex / Em = 540 / 590nm

注意:在開始實驗之前,在室溫下解凍所有試劑盒組分。

 

操作方法

1.準備庫存解決方案:

1.1Amplite Red底物儲備溶液(200X):將65μLDMSO(組分F)加入到Amplite Red小瓶(組分A)中。 應立即使用原液,任何剩余的溶液需要等分并在-20°C冷凍。

注意:避免反復凍融循環,避免光照。

1.2100U / mL HRP儲備溶液:將200μL測定緩沖液(組分C)加入到辣根過氧化物酶(組分D)的小瓶中。

注意:未使用的HRP原液應分成一次性等分試樣并儲存在-20°C。

1.310mM H2O2儲備溶液:將10L 3%H2O2(0.88M,組分B)加入870L測定緩沖液(組分C)中。

注意:稀釋的H2O2儲備溶液不穩定。 應丟棄未使用的部分。

 

2.準備H2O2測定緩沖液:

將5μL10mMH2O2儲備溶液(來自步驟1.3)加入5mL測定緩沖液(組分C)中。

 

3.準備連續稀釋的過氧化氫酶標準品(0至2 U / mL):

注意:在硫醇如DTT和β-巰基乙醇存在下,組分A是不穩定的。 硫醇的最終濃度高于10μM將顯著降低測定動態范圍。 NADH和谷胱甘肽(還原形式:GSH)可能干擾測定。

3.1將2μL1000U / mL過氧化氫酶標準品(組分E)加入1000μL測定緩沖液(組分C)中,得到2U / mL過氧化氫酶標準溶液。

3.2取500μL的2 U / mL過氧化氫酶標準溶液(來自步驟3.1)進行1:2連續稀釋,得到1,0.5,0.25,0.125,0.062,0.031和0 U / mL連續稀釋的過氧化氫酶標準品。

3.3如表2和3中所述,將連續稀釋的過氧化氫酶標準品和含過氧化氫酶的測試樣品加入到固體黑色96孔微量培養板中。

 

4.運行過氧化氫酶測定:

4.1將50μLH2O2測定緩沖液(來自步驟2)添加到過氧化氫酶標準品,空白對照和測試樣品的每個孔中(參見步驟3.3)以使總過氧化氫酶測定體積為100μL/孔。

注意:對于384孔板,每孔加入25μL樣品和25μLH2O2測定緩沖液。

4.2在室溫下孵育反應15至30分鐘,避光。

4.3根據下表制備測定混合物并避光:

4.4將50μL測定混合物(來自步驟4.3)加入過氧化氫酶標準品,空白對照和測試樣品的每個孔中(參見步驟3.3),使總測定體積為150μL/孔。

注意:對于384孔板,每孔加入25μL測定混合物。

4.5在室溫下孵育反應15至30分鐘,避光。

4.6使用熒光板讀數器監測Ex / Em = 540±10/590±10nm處的熒光增加(最佳Ex / Em = 540/590)。

注意:也可將板的內容物轉移到白色透明底板中,并用吸光度酶標儀在5765nm波長下讀數。 與熒光讀數相比,吸收檢測具有較低的靈敏度。

 

參考文獻

In-Vitro and In-Vivo Antioxidant Activity of the Butanolic Extract from the Stem of Ephedra Alte
Authors: Bahaa Al-Trad, Mahmoud A Al-Qudah, Mazhar Al-Zoubi, Riyadh Muhaidat, Janti Qar
Journal: Biomedical and Pharmacology Journal (2018)

 

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產品名稱 貨號
Amplite NAD檢測試劑盒 (熒光法)藍色熒光 Cat#15280
Amplite NADP檢測試劑盒(熒光法)藍色熒光 Cat#15281


說明書
Amplite 熒光法過氧化氫酶檢測試劑盒 紅色熒光 .pdf


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