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iFluor 488酰肼

貨號1082存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格1 mg價格2544
Ex (nm)491Em (nm)516
分子量890.57溶劑Water
產品詳細介紹


簡要概述

iFluor 488酰肼是美國AAT Bioquest生產的iFluor系列熒光染料,雖然FITC是用于制備綠色熒光生物綴合物的最流行的熒光標記染料,但是FITC存在某些限制,例如用于顯微鏡成像的嚴重光漂白和pH敏感熒光。與熒光素衍生物如FITC的綴合物相比,用iFluor 488染料制備的蛋白質綴合物要好得多。iFluor 488綴合物比熒光素綴合物明顯更亮,并且光穩定性更高。此外,iFluor 488的熒光不受pH(4-10)的影響。這種pH不敏感性是對熒光素的主要改進,熒光素僅在pH大于9時發出其最大熒光。iFluor 488酰肼相當穩定并且對羰基(例如醛)表現出良好的反應性和選擇性。iFluor系列染料是AF系列染料的完美替代品。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供最優質的iFluor 488酰肼。 

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產品說明書

樣本神經元細胞標記方案

該樣品標記方案用于用iFluor 488酰肼標記神經元細胞。 您可能需要針對特定細胞進行進一步優化。

1.準備染料儲備液:

1.1將1mg iFluor 488酰肼溶解在100μl200mMKCl中以制備10mM溶液(10mg / ml)。

1.2通過過濾對上述溶液進行滅菌。

 

2.標記細胞:

2.1通過使超極化電流通過電極,用iFluor 488酰肼儲備溶液(來自步驟1)標記神經元細胞(例如,Manduca sexta幼蟲中的附屬植物牽開器運動神經元)。

 

3.固定細胞:

3.1用4%多聚甲醛在100mM磷酸鹽緩沖液(pH 7)中固定細胞30分鐘。

注意:固定后,細胞可在乙醇中脫水并在二甲苯中清除。

 

樣本糖蛋白標記方案

該標記方案被開發用于山羊抗小鼠IgG與iFluor 647酰肼的綴合。您可能需要進一步優化您的特定蛋白質。

1.準備蛋白質醛溶液(溶液A):

1.1將5mg山羊抗小鼠IgG抗體溶于0.5mL 0.1M乙酸鈉,0.15M NaCl,pH5.5中

注意:確保蛋白質濃度> 10 mg / ml,以獲得最佳標記效率。

1.2通過離心30-60分鐘,用0.2ml的100mM高碘酸鈉(21mg / ml)處理蛋白質溶液。

1.3加入30μL乙二醇終止反應。

 

2.準備染料儲備溶液(溶液B):

2.1將1mg iFluor 染料酰肼溶解在0.1ml DMSO中以制備10mg / ml染料儲備溶液。通過移液或渦旋混合均勻。

 

3.運行綴合反應:

3.1在有效搖動下將10μL染料儲備溶液(溶液B)加入50μL蛋白質溶液(溶液A)中。

3.2繼續在室溫下旋轉或搖動反應混合物,在黑暗中保持30-60分鐘。

 

4.純化綴合物(以下方案是使用Sephadex G-25柱純化染料 - 蛋白質綴合物的實例。)

4.1根據制造說明準備Sephadex G-25色譜柱。

4.2將反應混合物(直接從步驟3)加載到Sephadex G-25柱的頂部。

4.3一旦樣品在頂部樹脂表面下方運行,就加入PBS(pH 7.2-7.4)。

4.4向所需樣品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成柱純化。

注1:為立即使用,染料 - 蛋白質偶聯物可以等分多次使用,而對于長期儲存,需要濃縮或冷凍干燥蛋白質結合物溶液。

注2:對于小規模標記,建議使用即用型旋轉商用色譜柱以方便使用。

 

參考文獻

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153--0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011--E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425--E436

 

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iFluor 488琥珀酰亞胺酯 Cat#1023
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說明書
iFluor 488酰肼.pdf


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