欧美精品黑人粗大|美国三级片|久久精品娱乐亚洲领先
<ins id="ij6oc"></ins>
<xmp id="ij6oc"><ins id="ij6oc"><button id="ij6oc"></button></ins>
<xmp id="ij6oc">
<form id="ij6oc"></form> <ins id="ij6oc"><xmp id="ij6oc">
<xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><button id="ij6oc"></button></form>
<xmp id="ij6oc">
<ins id="ij6oc"></ins>
<xmp id="ij6oc"><xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><form id="ij6oc"></form></form>
<xmp id="ij6oc"><button id="ij6oc"></button>
<xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><form id="ij6oc"></form></form>
<form id="ij6oc"></form><xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><form id="ij6oc"></form></form>
<xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><button id="ij6oc"></button></form>
<xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><button id="ij6oc"></button></form>
<form id="ij6oc"></form>

iFluor 594琥珀酰亞胺酯

貨號1029存儲條件 在零下15度以下保存, 避免光照
規格1 mg價格2544
Ex (nm)588Em (nm)604
分子量1160.42溶劑DMSO
產品詳細介紹


簡要概述

iFluor 594琥珀酰亞胺酯是iFluor系列熒光標記染料之一,可以覆蓋整個可見光譜。所有iFluor 染料都具有優異的水溶性。它們的親水性使有機溶劑的使用極小化。與常規的染料(如FITC,TRITC,Texas Red ,Cy3 ,Cy5和Cy7)相比,iFluor 染料具有更好的標記性能。一些iFluor 染料在某些抗體上明顯優于Alexa Fluor 標記染料。它們是用于標記蛋白質和核酸的極便宜的熒光染料(替代Alexa Fluor 染料)。每種iFluor染料的開發都與特定的Alexa Fluor 或其他標記染料(如DyLight 染料)的光譜特性相匹配。

琥珀酰亞胺基(NHS)酯被證明是用于胺修飾的極佳試劑,因為形成的酰胺鍵基本上與天然肽鍵相同并且穩定。這些試劑通常是穩定的并且與脂族胺顯示出良好的反應性和選擇性。當琥珀酰亞胺酯化合物用于綴合反應時,需要考慮的因素很少:1.溶劑:在大多數情況下,活性染料應溶于無水二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亞砜(DMSO)中。 2.反應pH:胺與琥珀酰亞胺酯的標記反應強烈依賴于pH。胺反應性試劑與非質子化脂族胺基團反應,包括蛋白質的末端胺和賴氨酸的β-氨基。因此,胺?;磻ǔT趐H 7.5以上進行。通過琥珀酰亞胺酯進行的蛋白質修飾通??梢栽趐H 8.5-9.5下進行。 3.反應緩沖液:使用胺反應試劑時,必須避免使用含有游離胺(如Tris和甘氨酸)和硫醇化合物的緩沖液。廣泛用于蛋白質沉淀的銨鹽(例如硫酸銨和乙酸銨)也必須在進行染料綴合之前除去(例如通過透析)。 4.反應溫度:大多數綴合在室溫下進行。特定標記反應可能需要升高或降低的溫度。iFluor系列染料是AF系列染料的完美替代品。

點擊查看光譜

點擊查看實驗方案



產品說明書

染色樣本分析

操作步驟

1.準備蛋白質儲備溶液(溶液A):

將100μL反應緩沖液(如1 M碳酸鈉溶液或1 M磷酸鹽緩沖液,pH~9.0)與900μL目標蛋白溶液(如抗體,蛋白質濃度> 2 mg / ml,如果可能)混合至100μL給予1 mL蛋白質標記原液。

注1:蛋白質溶液(溶液A)的pH值應為8.5±0.5。如果蛋白質溶液的pH低于8.0,則使用1M碳酸氫鈉溶液或1M pH 9.0磷酸鹽緩沖液將pH調節至8.0-9.0的范圍。

注2:蛋白質應溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中。如果蛋白質溶解在Tris或甘氨酸緩沖液中,則必須用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去廣泛用于蛋白質沉淀的游離胺或銨鹽(例如硫酸銨和乙酸銨)。

注3:不純的抗體、穩定的牛血清蛋白(BSA)抗體或明膠不會被很好的標記。疊氮化鈉或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應??梢酝ㄟ^透析或旋轉柱除去疊氮化鈉或硫柳汞,以獲得極佳標記結果。

注4:如果蛋白質濃度低于2 mg / mL,則結合效率會顯著降低。為獲得極佳標記效率,建議極終蛋白質濃度范圍為2-10 mg / mL。

 

2.準備染料儲備溶液(溶液B):

將無水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制備10-20mM儲備溶液。 通過移液或渦旋混合均勻。

注意:在開始綴合前準備染料儲備溶液(溶液B)。 及時使用。 染料儲備溶液的長期儲存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存兩周,避光保存。 避免凍融循環。

 

3.確定極佳染料/蛋白質比例(可選):

注意:每種蛋白質都需要不同的染料/蛋白質比例,這也取決于染料的性質。蛋白質的過度標記可能不利地影響其結合親和力,而低染料/蛋白質比率的蛋白質綴合物會降低靈敏度。我們建議您通過使用連續不同量的標記染料溶液重復步驟4和5來實驗確定極佳染料/蛋白質比率。通常,對于大多數染料 - 蛋白質綴合物,推薦使用4-6種染料/蛋白質。

3.1使用10:1摩爾比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白質)作為起始點:將5μl染料儲備溶液(溶液B,假設染料儲備溶液為10 mM)加入到樣品瓶中。蛋白質溶液(95μl溶液A)有效搖動。假設蛋白質濃度為10mg / mL并且蛋白質的分子量為~200KD,蛋白質的濃度為~0.05mM。

注意:蛋白質溶液中DMSO的濃度應<10%。

3.2運行綴合反應(參見下面的步驟4)。

3.3重復#3.2,溶液B /溶液A的摩爾比為5:1;分別為15:1和20:1。

3.4使用預制的旋轉柱純化所需的綴合物。

3.5計算上述4種結合物的染料/蛋白質比(DOS)(見說明書)。

3.6運行上述4種結合物的功能測試,確定極佳的染料/蛋白質比例,以擴大標記反應。

 

4.運行結合反應:

4.1有效加入適量的染料儲備溶液(溶液B)到蛋白質溶液(溶液A)的小瓶中晃動。

注意:溶液B /溶液的極佳摩爾比由步驟3.6確定。如果跳過步驟3,我們建議使用10:1溶液B(染料)/溶液A(蛋白質)的摩爾比。

4.2繼續在室溫下旋轉或搖動反應混合物30-60分鐘。

 

5.純化綴合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱純化染料 - 蛋白質綴合物的實例。

5.1按照制造說明準備Sephadex G-25色譜柱。

5.2將反應混合物(直接從步驟4)加載到Sephadex G-25柱的頂部。

5.3樣品在頂部樹脂表面下方運行時立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4向所需樣品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色譜柱純化。 合并含有所需染料 - 蛋白質綴合物的級分。

注1:立即使用時,染料 - 蛋白質偶聯物需要用染色緩沖液稀釋,并等分多次使用。

注2:對于長期儲存,染料 - 蛋白質綴合物溶液需要濃縮或冷凍干燥

 

參考文獻

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153--0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011--E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425--E436

 

相關產品

產品名稱 貨號
iFluor 594馬來酰亞胺 Cat#1064


說明書
iFluor 594琥珀酰亞胺酯.pdf


欧美精品黑人粗大
<ins id="ij6oc"></ins>
<xmp id="ij6oc"><ins id="ij6oc"><button id="ij6oc"></button></ins>
<xmp id="ij6oc">
<form id="ij6oc"></form> <ins id="ij6oc"><xmp id="ij6oc">
<xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><button id="ij6oc"></button></form>
<xmp id="ij6oc">
<ins id="ij6oc"></ins>
<xmp id="ij6oc"><xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><form id="ij6oc"></form></form>
<xmp id="ij6oc"><button id="ij6oc"></button>
<xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><form id="ij6oc"></form></form>
<form id="ij6oc"></form><xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><form id="ij6oc"></form></form>
<xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><button id="ij6oc"></button></form>
<xmp id="ij6oc"><form id="ij6oc"><button id="ij6oc"></button></form>
<form id="ij6oc"></form>