iFluor 488 疊氮化物
 | 貨號 | 1000 | 存儲條件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 規格 | 1 mg | 價格 | 3840 | |
| Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 | |
| 分子量 | 716.57 | 溶劑 | DMSO | |
| 產品詳細介紹 | ||||
簡要概述
iFluor 488 疊氮化物是美國AAT Bioquest生產的熒光標記染料，FITC是用于制備綠色熒光生物共軛物的最流行的熒光標記染料，但是FITC存在某些限制，例如用于顯微鏡成像的嚴重光漂白和pH敏感熒光。與熒光素衍生物如FITC的綴合物相比，用iFluor 488染料（Ex / Em = 491nm / 520nm）制備的蛋白質綴合物要好得多。iFluor 488綴合物比熒光素綴合物明顯更亮，并且光穩定性更高。此外，iFluor 488的熒光不受pH（4-10）的影響。這種pH不敏感性是對熒光素的主要改進，熒光素僅在高于9.9的pH下發出其最大熒光。iFluor 488疊氮化物染料相當穩定并且對于點擊化學應用顯示出與炔基的良好反應性和選擇性。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商，為您提供最優質的熒光標記染料。
產品說明書
操作方案
標記寡核苷酸
1.準備以下試劑：
200mMTHPTA [tris（3-羥丙基三唑基甲基）胺]水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烴修飾的低聚水溶液（盡可能濃縮，> 10 mg / mL）
100 mM抗壞血酸鈉水溶液
10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網站）
2.在反應前將CuSO4與THPTA以1：2的比例混合并充分渦旋幾分鐘。該溶液在冷凍時可穩定數周。
3.向炔烴改性的低聚物溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為2-5當量）。
4.加入5當量的THPTA / CuSO4工作溶液（來自步驟1）。
5.加入10-30當量的抗壞血酸鈉。
6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應混合物30-60分鐘。
7.乙醇通過所需方法（例如HPLC）沉淀或純化寡聚物。
標記肽
1.準備以下試劑：
200 mM THPTA配體水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烴修飾肽水溶液或DMF溶液（取決于您的肽溶解度，> 10 mg / mL）
100 mM抗壞血酸鈉水溶液
10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網站）
2.在反應前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。 該溶液在冷凍時可穩定數周。
3.向炔烴修飾的肽溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為5-10當量）。
4.加入5-10當量的THPTA / CuSO4。
5.加入10-20當量的抗壞血酸鈉。
6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應混合物30-60分鐘。
7.通過HPLC純化您想要的肽。
標記炔烴有機小分子
1.準備以下試劑：
200 mM THPTA配體水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烴化合物水溶液或DMF溶液（取決于您的化合物溶解度，> 10mg / mL，）
100 mM抗壞血酸鈉水溶液
10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網站）。
2.在反應前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。當冷凍時，該溶液可穩定數周。
3.向炔烴溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為5-10當量）。
4.加入25當量的THPTA / CuSO4。
5.加入50當量的抗壞血酸鈉。
6.在室溫下攪拌反應混合物30-60分鐘。
7.通過色譜或其他方法純化您想要的分子。
標記生物聚合物
1.準備以下試劑：
200mM THPTA配體水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烴改性的水中生物聚合物（盡可能濃縮，例如> 5毫克/毫升）
100 mM抗壞血酸鈉水溶液
10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關推薦的溶劑，請參閱我們的網站）。
2.在反應前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。 該溶液在冷凍時可穩定數周。
3.向炔烴改性的生物聚合物溶液中加入過量的染料疊氮化物（負載比：5-20染料疊氮化物/炔烴）。
4.加入5摩爾當量（參考染料疊氮化物）的THPTA / CuSO4。
5.加入10當量的抗壞血酸鈉（參見染料疊氮化物）。
6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應混合物30-60分鐘。
7.通過凝膠過濾或透析純化您想要的分子。
標記細胞，細胞裂解物或生物樣品
1.準備以下試劑：
水性緩沖液或100mM THPTA配體水溶液
20mM CuSO4水溶液
300mM抗壞血酸鈉水溶液
2.5mM炔烴或疊氮化物標記試劑水溶液或DMSO溶液
2.對于每個疊氮化物或炔烴修飾的細胞或細胞裂解物樣品，將以下試劑加入1.5 mL微量離心管中，然后短暫渦旋混合。
50μL細胞或細胞裂解液樣品
50μLPBS緩沖液
50μL5mM相應的染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（或染料炔烴）檢測試劑
3.加入10μL100mM THPTA溶液，短暫渦旋混合。
4.加入10μL20mM CuSO4溶液，短暫渦旋振蕩。
5.加入10μL300mM抗壞血酸鈉溶液以引發點擊反應，短暫渦旋混合。
6.保護點擊反應不受光照，使其在室溫下孵育30分鐘。
7.點擊標記細胞或細胞裂解物并準備用于下游處理和分析。
參考文獻
Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153--0769
Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011--E2018
Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425--E436
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